今天就简单介绍下GST pull-down实验,希望能让做相关实验的小伙伴对此有更深入的理解。 一、实验原理 利用重组技术将诱饵蛋白A与GST进行融合,然后将GSH固定于琼脂糖珠,形成GSH-琼脂糖珠,进而将融合蛋白(A-GST)结合到固定化的GSH载体上,此时,当环境中存在与蛋白A相互作用的蛋白B时,就会被吸附,形成琼脂糖珠-GSH-...
GST pull-down技术是体外条件下研究蛋白质相互作用的方法。先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用Western Blot检测已...
GST Pull-down实验用于研究蛋白之间的直接或间接相互作用，此外还可以结合色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选已知蛋白的未知互作蛋白。由于实验时需要将蛋白在体外纯化出来，因此这种方法属于体外研究蛋白互作的方法。实验原理 GST Pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲...
1.GST Pull-Down实验的基本原理 GST Pull-Down实验基于亲和层析的原理，利用谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白的特异性结合能力。在实验中，目标蛋白或蛋白复合物被融合到GST标签蛋白上，形成GST融合蛋白。细胞裂解产生的蛋白质混合物与GST融合蛋白相互作用，使目标蛋白与GST结合形成复合物。随后，通过将混合物与固定在...
GST pull-down一般用于体外实验,因为诱饵蛋白是需要加上GST标签的重组蛋白,所以是非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。 在实验难度上,重组诱饵蛋白一般采用原核表达体系,有高效的商业化载体(真核表表达体系也可以做,但需要找到合适的载体);...
3. Pull Down原理 为了将24 FPS的电影转换为电视标准的30 FPS或60 FPS,Pull Down技术通过在电影的每一帧之间插入额外的帧来实现。这样可以在不改变原始影像的前提下,将电影平滑地转换为电视标准。 3.1 3:2 Pull Down 3:2 Pull Down是最常用的Pull Down技术。它使用一个3帧和一个2帧的模式来转换电影帧。
▲ GST下拉实验（GST-pull down）技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与...