GST Pull-down实验用于研究蛋白之间的直接或间接相互作用，此外还可以结合色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选已知蛋白的未知互作蛋白。由于实验时需要将蛋白在体外纯化出来，因此这种方法属于体外研究蛋白互作的方法。实验原理 GST Pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲...
它的基本原理是将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白)，洗脱结合物通过 SDS-PAGE 电泳分离，最后经western blot或质谱分析，从而证实两种蛋白间的相互作用；“诱饵蛋白”和“捕获蛋...
GST,全称为glutathione-S-transferase,即为谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(glutathione,GSH)结合,其与CoIP实验都是验证蛋白互作的有效方法。今天就简单介绍下GST pull-down实验,希望能让做相关实验的小伙伴对此有更深入的理解。 一、实验原理 利用重组技术将诱饵蛋白A与GST进行融合,然后将GSH固定于琼脂糖珠,形成...
一、GST pull down实验原理 GST pull down的主要原理是利用DNA重组技术将已知蛋白与GST融合，而融合蛋白通过GST与固化在载体上的GTH（谷胱甘肽）亲和结合。简单来说，我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作，将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋白以及能特异性结合GST的Sephrose 4B beads混合在一起孵育一定时间，然后洗去未...
GST pull-down技术原理 GST融合蛋白pull-down方法是将诱饵蛋白质和GST标签融合表达，一步纯化后与含有目的蛋白质的溶液进行孵育，利用谷胱甘肽-Sepharose将GST-融合蛋白-目的蛋白复合物沉淀下来，然后进行SDS-PAGE鉴定与诱饵蛋白质相互作用的蛋白质。一般来说，GST融合蛋白pull-down方法用于两个方面：一是鉴定能与已知融合...
4、GST pull-down 分离原理 GST pull-down中所用到的琼脂糖球珠载体由于其复合体比重大(而非体系蛋白比重小),能够能借助离心力更快速的沉淀分离。在经过漂洗、离心之后就可以达到分离探针蛋白的目的。 5、GST pull-down 实验流程 ①蛋白的抽提与纯化:原核表达蛋白分离纯化。 在裂解液上清中加入适量体积50%谷胱甘肽...
1.GST Pull-Down实验的基本原理 GST Pull-Down实验基于亲和层析的原理，利用谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白的特异性结合能力。在实验中，目标蛋白或蛋白复合物被融合到GST标签蛋白上，形成GST融合蛋白。细胞裂解产生的蛋白质混合物与GST融合蛋白相互作用，使目标蛋白与GST结合形成复合物。随后，通过将混合物与固定在...