二、GST beads结合GST蛋白的原理 1. GST beads与GST蛋白的结合是一种特异的亲和结合。GST beads表面覆盖有GST蛋白,GST蛋白与GST beads表面的亲和基质之间通过疏水相互作用、静电相互作用等力。GST蛋白通过与GST beads表面的亲和基质结合,从而实现了对GST蛋白的特异性富集。 2. GST beads与GST蛋白之间的结合是可逆的...
GST Elution buffer洗脱原理是通过还原型的GSH和bead上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白,从而将标签蛋白从beads上洗脱。GST Elution buffer中加入tritonX-100能够增加蛋白的溶解度,加入甘油不仅能降低目标蛋白的极性,同时能保护目标蛋白的活性。对于目标蛋白失去活性的情况可以使用GST Elution buffer(no triton)。 产品介绍 组分...
GST pull down是将GST融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上,与溶液中的目的蛋白相结合。可用来确定融合(或探针)蛋白与未知(或靶)蛋白间的新的相互作用。先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作...
1. 实验原理： 通过将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，利用谷胱甘肽与GST标签的特异性结合能力。 与细胞裂解液孵育后，与GST融合蛋白相互作用的蛋白将被吸附在Beads上。 经过洗涤去除非特异性结合的蛋白后，使用特定的洗脱液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来。2. 关键步骤： 缓冲液配制：包括...
GST Magnetic Beads 是1μm大小均匀的,表面包覆有高密度谷胱甘肽的二氧化硅基质超顺磁磁珠。这种磁珠是特定设计主要用于免疫沉淀反应,或者快速,一步法纯化带有 GST-标签的重组蛋白,纯化过程大约需要15-25分钟。 产品特点: ·快捷,简单的一步法高通量操作,无需纯化柱或过滤器,或重复移液、离心等操作(图 1) ...
洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用Western Blot检测已知蛋白A和已知蛋白B的互作验证,也可用质谱鉴定出与已知蛋白A相互作用的未知蛋白。 二、GST pull-down实验原理图 三、GST pull-down实验操作步骤...
GST pull-down是体外验证两种蛋白直接相互作用的研究方法,其原理是将目的蛋白与GST融合表达,固定在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上作为与目的蛋白亲和的载体,充当“诱饵蛋白”,捕获相互作用的“捕获蛋白”(靶蛋白),将结合物洗脱后WB分析确认两种蛋白的相互作用。
1、蛋白纯化和 GST 沉降技术【原理】细菌表达的谷胱甘肽s转移酶(GST)融合蛋白主要用于蛋白的亲和纯化,也可以将 GST 融合蛋白作为探针,与溶液中的特异性搭档蛋白结合,然后根据 谷胱甘肽琼脂糖球珠能够沉淀 GST 融合蛋白的能力来确定相互作用的蛋白。一 般在得到目标蛋白的抗体前,或发现抗体干扰蛋白质蛋白质之间的相互...
附:GSTSep Glutathione MagBeads(Cat#20562ES)产品特点 1、通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。 2、 使用该磁珠进行GST Pull-down实验,由于磁性分离不需要多次离心和较长的孵育时间,与传统的层析法相比,操...