经 DOX 处理后,表达 GSDMD-NT-BFP 的细胞中 MitoTracker 和 TMRM 强度均下降,最终死亡,以 PI 或 SYTOX 摄取量评估(图 3A 和 3B),而表达 FL-GSDMD-BFP 的细胞中线粒体染料强度和 PI 摄取量无变化。GSDMD-NT-BFP 至少在质膜通透前 50 分钟与线粒体染料定位(图 3A 和 3B),证实了 GSDMD-NT 早期靶向线...
通过定义每个细胞在首次检测到染料摄取 (质膜损伤) 时的时间为 0 来同步焦亡变化:在 DOX 后,最终经 PI 或 SYTOX 摄取评估死亡的 GSDMD-NT-BFP 表达细胞中,MitoTracker 和 TMRM 强度都降低了(图 3A 和 3B),而在表达 FL-GSDMD-BFP 的细胞中,线粒体染料强度和 PI 摄取保持不变 (图 S2C-2F)。GSDMD-NT-...
实验通过MitoTEMPO和溴化乙锭的实验结果，强调了线粒体在抵抗焦亡中的防护屏障作用。4. 动态过程与机制探索 - GSDMD-NT-BFP融合蛋白实验揭示了其在细胞内的早期定位和线粒体膜通透性的精确时间线。ROS在焦亡中扮演着放大效应，尤其是在HEK293T细胞中，GSDMD-NT与线粒体的交互作用尤为明显。关键发现的...
免疫印迹检测及流式分析发现,焦亡细胞分泌的囊泡中包含明显的GSDMD- NT- BFP蛋白及其信号。通过免疫金标记结合电子显微镜成像,发现这些GSDMD-NT位于焦亡细胞分离出来的囊泡上。 进一步生化和细胞分析表明,焦亡细胞囊泡处理过的旁观细胞上能够分离检测GSDMD-NT-BFP并且这些GSDMD-NT位于旁观细胞膜上。从而表明焦亡细胞囊泡...