将IVT mRNA封装在含DLin-MC3-DMA、DSPC、胆固醇和PEG(50:10:38.5:1.5摩尔比)的LNPs中,得到平均直径为100nm的HRV2 IRES-GSDMDNTmRNA-LNPs,与m7G GSDMDNTmRNA相比,其在高表达eIF4G2/PTBP1的癌细胞中可有效翻译为具有肿瘤细胞选择性的GSDMDNT,且积聚在细胞...
但含胱天蛋白募集域 (CARD)且与凋亡相关斑点样蛋白(ASC)在两个室中mRNA表达水平无差异(图1A)。接下来,研究人员通过免疫组化检测远端结肠组织中GSDMD的蛋白水平,使用抗mGSDMD(小鼠源性GSDMD蛋白)抗体,该抗体可以识别全长和切割的mGSDMD...
制备HRV2 IRES驱动的GSDMDNTIVT mRNA,将4μgpAOX1-EIF4G2、2μg pHT43-PTBP1(过表达质粒)和2μg前述线性IVT mRNA混合在含有1ml枯草芽孢杆菌(OD=1.0)的电穿孔杯中进行共转染(电穿孔缓冲液含20mM苹果酸钠、20mM MgCl2、500mM蔗糖),结果发现HRV2 IRES可在EIF4G2和PTBP1帮助下启动GSDMDNT表达,导致生长毒性。
为了验证 ZDHHC5 和 ZDHHC9 介导的 GSDMD 棕榈酰化的生理意义,作者使用了 PMA 分化的巨噬细胞样 THP-1 细胞。THP-1 细胞同时表达 ZDHHC5 和 ZDHHC9,在 LPS 刺激后,它们在 mRNA(图 5A)和蛋白水平(图 5B)上的表达均显著上调。ZDHHC5 和 ZDHHC9 与 GSDMD 相互作用。此外,在 LPS 刺激下,这种结合增加了...
GsdmdCKO小鼠显示出Pax7、MyoD和MyoG等与MuSCs的激活程序相关基因的mRNA水平降低,且MuSCs的增殖明显减弱,分化水平依次降低。随后,研究者观察到再生过程中GSDMD蛋白会在肌内巨噬细胞中发生降解。此外,GSDMD缺乏在再生早期不影响巨噬细胞的急性浸润,且并没有改变组织再生的一个关键指征:血管密度。总的来说,这些数据表明...
NLRP3抑制还导致IL-1家族细胞因子mRNA水平升高,以及这些细胞因子前体的积累。此外,NLRP3抑制还增加了结直肠肿瘤中F4/80+巨噬细胞的数量,与GSDMD基因敲除小鼠中观察到的结果类似(图4e)。在NLRP3抑制后,我们并未观察到Gr-1+髓样细胞或T细胞比例发生显著变化(图4f、g)。这些数据表明,NLRP3在肿瘤细胞中激活了半胱...
GsdmdCKO小鼠显示出Pax7、MyoD和MyoG等与MuSCs的激活程序相关基因的mRNA水平降低,且MuSCs的增殖明显减弱,分化水平依次降低。随后,研究者观察到再生过程中GSDMD蛋白会在肌内巨噬细胞中发生降解。此外,GSDMD缺乏在再生早期不影响巨噬细胞的急性浸润,且并没有改变组织再生的一个关键指征:血管密度。总的来说,这些数据表明...
GsdmdCKO小鼠显示出Pax7、MyoD和MyoG等与MuSCs的激活程序相关基因的mRNA水平降低,且MuSCs的增殖明显减弱,分化水平依次降低。随后,研究者观察到再生过程中GSDMD蛋白会在肌内巨噬细胞中发生降解。此外,GSDMD缺乏在再生早期不影响巨噬细胞的急性浸润,且并没有改变组织再生的一个关键指征:血管密度。总的来说,这些数据表明...
不同于gasdermin家族的其它成员，GSDMB的编码基因在转录时会通过mRNA可变剪切产生不同的蛋白亚型（isoforms）。这些GSDMB亚型具有几乎完全相同的N端和C端结构域，都能够被效应蛋白IpaH7.8特异识别并高效降解。GSDMB不同亚型的序列差别主要来自由外显子6和7编码的两个结构域的连接区。这段差异性的序列恰好位于保守的...
在其他细胞焦亡成分中,观察到大多数结直肠癌肿瘤中AIM2表达显著降低或缺失,且与患者预后不良有关。NLRP1水平在大肠癌肿瘤组织中同样降低,并与转移增加和生存率降低有关。乳腺癌患者组织中的caspase-1 mRNA水平显著降低,此外,caspase-1的缺失与前列腺癌和大肠癌的肿瘤发生有关。