GRNA序列的构建通常是基于两个关键元素:靶向序列和Scaffold序列。靶向序列由20个核苷酸(碱基)组成,负责指引Cas9靶向到基因组中的特定位置,同时在设计过程中需要特别注意靶向序列的选择和校对,以确保其具有足够的特异性和准确性;而Scaffold序列则是一个较短的RNA序列,通常由12个核苷酸组成,主要作用是连接靶向序列和Cas9的...
1.PAM序列兼容性 关键作用：CRISPR-Cas蛋白需通过**原间隔相邻基序（PAM）**识别并结合目标DNA。不同C...
2)设计引物:上下游引物的3'端分别匹配 PECgRNA 质粒上的 sgRNAScaffold 和 J23119 启动子部分,5'端携带 20 nt 的 SgRNA 序列 设计引物序列如下: thrA-sgRNA-1-F:agaatatcatctgctgaacdgttttagagctagaaatagcaagtt thrA-sgRNA-1-R:pggttcagcagatgatattct actagtattatacctaggactgagct thrA-sgRNA-2-F: gccgg...