Gibson Assembly® Chemical Transformation Protocol (E5510) Gibson Assembly® Electrocompetent Cells Transformation Protocol (E5510) 说明书 产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。 manualE2611_E5510 工具& 资源 选择指南 Synthetic Biology/DNA Assembly Selection Chart Web 工具 NEBuilder® As...
PCR Protocol Phusion® DNA Polymerase Gibson Assembly® Master Mix – Assembly (E2611) Gibson Assembly® Protocol (E5510) Gibson Assembly® Chemical Transformation Protocol (E5510) Gibson Assembly® Chemical Transformation Protocol (E2611) Gibson Assembly® Electrocompetent Transformation Protocol...
Step 1 准备所需载体+PCR扩增DNA片段 (1)通过酶切方式,将不需要的片段切下,通过凝胶电泳分离出所需的vector,并使用胶回收试剂盒回收vector。 这部分用到的protocol主要参考限制性内切酶说明书+胶回收试剂盒说明书。 (2)前期通过SnapGene上的Gibson Assembly工具事先算好质粒构建的路线方针(嘻嘻),所以引物是提前设计...
总结而言，Gibson组装与OEP-PCR在原理和应用上存在明显差异。OEP-PCR通过引物设计和聚合酶作用实现片段连接，但存在形成疤痕结构的风险。Gibson组装则通过同源序列的添加，利用三种酶（外切酶、聚合酶、连接酶）的协同作用，实现高效、无疤痕的片段连接，为DNA克隆和重组提供了更为优化的方法。
具体的protocol: 1、计算体系中含有的所有DNA的量: NEB recommends a total of 0.02–0.5 pmols of DNAfragments when 1 or 2 fragments are being assembled into a vector and 0.2–1.0pmoles of DNA fragments when 4–6 fragments are being assembled. Efficiency ofassembly decreases as the number or le...
第二个例子是将Gibson Assembly与CRISPR一起使用,最近也被发表了出来(Jiang等2015),其中细菌染色体的非常大的片段(最高可达100kb)被CRISPR特异性切割,然后使用Gibson Assembly组装成载体。在这种情况下,载体通过PCR扩增出包含与细菌染色体片段同源的区域。利用CRISPR切割来规避PCR扩增染色体片段的需要,在技术上具有挑战性...
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我的问题是前段，因为Gibson Assembly 是两条线性链的链接，我只是有点疑惑，怎么保证自己的质粒在需要的...
区别很大，oepcr的早点在于引物设计搭配聚合酶的能力实现的片段连接，进行载体片段克隆时，聚合酶对质粒...
Gibson Assembly Cloning Procedure 1.Design your plasmid and order primers (see figure to the right).When designing your plasmid, think about what DNA segments you will need to join to create your final plasmid. Adjacent segments should have identical sequences on the ends (sequences A and B ...