Gibson组装是一种基于同源重组技术的DNA定向克隆方法,它可以将具有重叠区域的多个DNA片段无缝地连接起来,形成一个完整的DNA分子。Gibson组装在合成生物学和基因工程领域有很多应用,例如构建多基因表达载体、组装合成基因组、设计CRISPR/Cas系统等。 Gibson组装的原理和步骤如下: 设计引物:根据目标DNA片段和载体DNA的序列,...
Gibson组装的原理 🧬 Gibson组装其实就是一个三步反应的过程,听起来很简单,但实际操作起来还是需要一些小技巧的。具体步骤如下: T5核酸外切酶切割:首先,T5核酸外切酶会从DNA片段的5'端切割一条链,产生一个单链DNA末端(overhang)。这个overhang会和其他DNA片段的overhang配对,形成一个有间隙(gap)的环状DNA。 Phusion...
原理：Gibson assembly是一种one step, one pot的快速基因组装方法。它只需要将基因片段和需要的三种酶混合在同一个管内在50°C下培养15-60 min就可以得到组装好的DNA。装配原理基于DNA片段间的重叠区域，过程依赖于三种酶：DNA 外切酶（T5 exonuclease）, 高保真DNA聚合酶。（Phusion polymerase）和耐热D...
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原理：Gibson assembly是一种one step, one pot的快速基因组装方法。它只需要将基因片段和需要的三种酶混合在同一个管内在50°C下培养15-60 min就可以得到组装好的DNA。装配原理基于DNA片段间的重叠区域，过程依赖于三种酶：DNA 外切酶（T5 exonuclease）, 高保真DNA聚合酶。（Phusion polymerase）和耐热...