mRFP-GFP-LC3是研究细胞自噬最常用的工具之一，在mRFP-GFP-LC3的基础上汉恒生物研发出了AAV-LC3工具，可实现在体自噬监测。后续还研发出了可定位细胞器的自噬研究工具，其原理是用细胞器-RFP（红光）和LC3-GFP（绿光）分别标记细胞器和自噬小体，实现两者的共定位，例如线粒体定位的RFP（mito-RFP）、高尔基体定...
细胞内表达的GFP-LC3-RFP-LC3ΔG融合蛋白经Atg4内肽酶加工，断裂成GFP-LC3和RFP-LC3ΔG，后者缺乏与膜结合所需的C末端甘氨酸。GFP-LC3和RFP-LC3ΔG分别充当自噬底物和内对照。GFP-LC3相对于RFP-LC3ΔG的比值与自噬强弱呈负相关。这种方法可以使用流式细胞仪或荧光酶标仪检测自噬。2.3.4 Keima Keima是一种独...
是微管相关蛋白轻链3(MAP1LC3)的简称，它贯穿整个自噬过程，哺乳动物的LC3可分为三种：LC3A、LC3B和LC3C。自噬发生时，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中，LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工，产生分子量为 14kD 的 LC3-II，并...
目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP)-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP...
①RFP-GFP-LC3双荧光标记 当自噬体与溶酶体未发生融合时,RFP荧光和GFP荧光都是存在的,当自噬体与溶酶体发生融合时,导致GFP淬灭,此时只能观察到红色荧光 ②GFP-LC3单荧光标记 利用了LC3在自噬形成时聚集的原理,即无自噬时,GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中 ...
如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。 红色斑点是自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点是自噬体(RFP+GFP). 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱,实时监测自噬发生过程,准确,清晰,直观! 参考文献
GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过DAL Green+DAP Red两种探针联用，检测自噬流的发生...
红色荧光蛋白(RFP)是一种通用的生物标记,可用于监测生理过程,可视化蛋白质定位并检测体内转基因表达。RFP可以被488 nm或532 nm激光线激发,并在588 nm处被更佳检测到。 什么是蓝色荧光蛋白? TagBFP(科学名称mTagBFP)是一种通过TagRFP的位点特异性和随机诱变产生的单体蓝色荧光蛋白 [Subach等。2008]。TagBFP具有明...
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG...
激光共聚焦荧光显微镜分析感染效率,饥饿处理稳定感染细胞,激光共聚焦荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点.结果:经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞系;激光共聚焦荧光显微镜显示RFP和GFP荧光率均达95%以上,饥饿处理后自噬斑点显著增多.结论:成功构建稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞系,为后续自噬...