(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
本试验中,HepG2GFP总RNA转染后的DCs在荧光显微镜下观察,胞质呈现绿色荧光,证实GFP mRNA可以在DCs胞质内正常表达,同时说明肿瘤细胞总RNA同样也可以在DCs胞浆内进行翻译表达.转染后CD83,CD80,CD86,HLADR表达明显升高,IL12分泌明显增加,说明RNA转染,促进了DCs的体外成熟.成熟DCs主要通过MHCI类途径,将肿瘤细胞总RNA在DCs...
对于CRISPR转染需要反复尝试以及检测未能实现高水平切割的情况，对编辑的细胞进行富集可能会有用。通过使用我们的单载体系统，来自同一mRNA的共表达Cas9和GFP实现了可通过荧光活化细胞分选（FACS）而对具有所需的基因组编辑的细胞系进行富集的可能性。通过能够使用FACS而基于GFP进行检测和富集，它显著减少了与基因组编辑应用...
b)转染的dsDNA总量减少。 在许多情况下,某些细胞类型对高剂量的dsDNA敏感,将替代报告质粒形式的额外dsDNA添加到现有的CRISPR和供体载体构建体中可导致细胞毒性。c)通过Cas9-GFP mRNA、体外转录的gRNA和单链寡核苷酸(ssODN)可以选择使用“不含dsDNA”的方法。Cas9和GFP蛋白编码区通过编码2A肽的小序列连接。2A肽是一种...
目的 研究酵母mRNA在哺乳动物细胞中的翻译表达。方法 半乳糖诱导GFP基因在酿酒酵母细胞中表达,提取其mRNA ,RT -PCR鉴定,并以脂质体为介导,对血管内皮细胞HUVEC以及绿猴肾细胞COS - 7进行体外转染。结果 被转染HUVEC和COS - 7细胞分别出现绿色荧光,报告基因GFPmRNA在动物细胞中被识别、翻译。结论 提示酵母mRNA可能...
pMini-CopGFP pMini-CopGFP 是专门应用于 mRNA 体外剪接实验(Minigene) 的质粒载体,此载体适用于所有剪接功能的实验,具有独立的绿色荧光蛋白检测转染效率。
翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础,建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发...
分别将对照siRNA和GFPT2 siRNA转染至DU145和PC3细胞系中,成功构建了干扰GFPT2的细胞系。通过qRT-PCR和Western blot验证siGFPT2的干扰效果。结果显示,靶向GFPT2的两条siRNA均显著降低了GFPT2的mRNA和蛋白水平(图3)。 图3 qRT-PCR和Western blot验证GFPT2 siRNA的干扰效果 Figure3.The interference efficiency of ...
由于GFP稳定、灵敏度高、无生物毒性、荧光反应不需要任何外源反应底物及表达无物种或细胞组织的专一性,检测简单，结果真实可靠，是一种独特的报告蛋白(Reporterprotein)。可广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移及相互作用、信号传递、转染与转化,以及细胞的分离与纯化等研究领域。 图1绿色荧光蛋白 196...
Ad5-IFN—γ—GFP重组腺病毒转染的骨髓间充质干细胞对小鼠喉旁组织IFN—γ蛋白表达的实验研究