转染:通过化学或者物理方法将目的基因导入真核细胞中,称为非病毒法。具体内容是将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。 RNA干扰:是进化过程中高度保守的,由双链RNA诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象。将体外合成小的双链RNA(siRNA)序列导入机体或细胞中,机体或细胞中与之有同源序列...
本试验中,HepG2GFP总RNA转染后的DCs在荧光显微镜下观察,胞质呈现绿色荧光,证实GFP mRNA可以在DCs胞质内正常表达,同时说明肿瘤细胞总RNA同样也可以在DCs胞浆内进行翻译表达.转染后CD83,CD80,CD86,HLADR表达明显升高,IL12分泌明显增加,说明RNA转染,促进了DCs的体外成熟.成熟DCs主要通过MHCI类途径,将肿瘤细胞总RNA在DCs...
目的 提取重组酿酒酵母 mRNA,并对动物细胞进行转染,为进一步探索证明重组酿酒酵母 mRNA可以作为基因治疗物质提供依据.方法 利用酶法制备重组酿酒酵母的原生质体后提取其总RNA.对提取的总RNA纯化后利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,鉴定GFP基因的正确无误后,脂质体转...
对于CRISPR转染需要反复尝试以及检测未能实现高水平切割的情况，对编辑的细胞进行富集可能会有用。通过使用我们的单载体系统，来自同一mRNA的共表达Cas9和GFP实现了可通过荧光活化细胞分选（FACS）而对具有所需的基因组编辑的细胞系进行富集的可能性。通过能够使用FACS而基于GFP进行检测和富集，它显著减少了与基因组编辑应用...
细胞转染目的 用绿色荧光蛋白(GFP)反映RNA干扰(RNAi)载体的转染率,以研究RNAi载体的抑制效果.方法 将GFP基因和RNAi片段(特异性针对Bcl-2基因)连接至pC1载体上,构建共表达载体GFP/RNAi及其对照载体,转染293细胞,用荧光显微镜,流式细胞仪检测细胞的GFP转染率,并用TR-PCR分析RNAi抑制Bcl-2 mRNA表达的效果.结果 在...
由于GFP - Trap中使用的结合蛋白与山羊、小鼠、大鼠或人抗体没有任何显著的同源性,因此不应发生与第二Ig特异性抗体的非特异性反应。 6.当我使用N端和C端GFP融合时,结合有什么不同吗? GFP-Trap®对C末端GFP融合具有稍高的亲和力。您可以通过延长培养时间( 1 - 2h,而不是15 - 30分钟)来补偿这一点。
b)转染的dsDNA总量减少。 在许多情况下,某些细胞类型对高剂量的dsDNA敏感,将替代报告质粒形式的额外dsDNA添加到现有的CRISPR和供体载体构建体中可导致细胞毒性。 c)通过Cas9-GFP mRNA、体外转录的gRNA和单链寡核苷酸(ssODN)可以选择使用“不含dsDNA”的方法。
而2A肽可以自我切割，这样就不需要那么多序列（特别是慢病毒转染，序列太大会影响病毒包装滴度）。另外，...
Gan W, Rhoads RE. Internal initiation of translation directed by the 5'-untranslated region of the mRNA for eIF4G, a factor involved in the picornavirus-induced switch from cap-dependent to internal initiation. J. Biol. Chem. 271: 623-626, 1996. PubMed: 8557663 ...
由于GFP稳定、灵敏度高、无生物毒性、荧光反应不需要任何外源反应底物及表达无物种或细胞组织的专一性,检测简单，结果真实可靠，是一种独特的报告蛋白(Reporterprotein)。可广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移及相互作用、信号传递、转染与转化,以及细胞的分离与纯化等研究领域。 图1绿色荧光蛋白 196...