原理如下: 1. Mcherry是一种红色荧光蛋白,GFP是一种绿色荧光蛋白,它们都可以通过荧光显微镜观察。 2. LC3是一种微管相关蛋白3(Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3),参与调控和介导细胞自噬过程。LC3有LC3-I和LC3-II两种形式,LC3-I是胞浆中的非结合形式,LC3-II是结合在自噬小体(autophagosome)...
mRFP-GFP-LC3串联荧光蛋白腺病毒中表达的GFP和mRFP用于标记及追踪LC3,GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体(由GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光,原理如下图所示)。 统计方法 我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬...
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mRFP-GFP-LC3 收到病毒后的处理 (一)、腺病毒的储存 1、腺病毒采用冰袋运输。 (1)、收到病毒液后如未融化请置于-80C冰箱,下次使用时再进 行分装; (2)、如客户收到时腺病毒已融化,请直接分装后置于-80C冰箱 保存;若短期内用于实验,可分装部分于4C保存(尽量一周内用完)。 2、尽量避免反复冻融,否则会降低...
其中,电镜观察法由于受到实验条件和设备的限制应用范围有限;而由于自噬过程发生快速,通过IB/WB检测LC3-II水平和GFP-LC3的方法易受到实验进行时长的影响。 想要准确检测自噬流的变化,需要多种技术手段共同使用,才能达到理想的实验效果,产生具有说服性的实验结果。
自噬双荧光标记慢病毒吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒，可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是稳定的荧光表达基团，不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境，导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱表明溶酶体与...
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