Flag碱基序列的名称来源于其英文名称Flag,全称为Fluorescence Activating and Absorbing Tag,即荧光激活和吸收标记。 Flag碱基序列结构 Flag碱基序列的结构为DYKDDDDK。其中D代表天冬氨酸,Y代表酪氨酸,K代表赖氨酸。在这八个氨基酸中,前三个氨基酸DYK常常作为探针的识别序列,而剩下的五个氨基酸DDDDK则起到了纯化的作用。
FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功,没有碱基突变.FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能,FLAG-Kir2.3成功表达于非洲爪蟾卵母细胞,双电极电压钳可以记录到电流.免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达.结论 成功构建重组质粒DNA,FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达.%Objective Flag tag will be ...
在pCMV-Tag2A载体中,当表达到BamHI时,变成了GCG GAT CC+ATG XXX,如果不加以改造就成了GCG GAT CCA TGX XX…,产生移码,蛋白序列发生变化, 只要在酶切位点之后添加1个碱基,变为GCG GAT CCX+ATGXXX,就能避免产生移码;在pCMV-Tag2B载体中,当表达到BamHI时, 刚好是GGA TCC+ATG XXX,不移码,可以正确表达了;...
下载序列 pCMV3-N-FLAG: • CMV 启动子: 碱基 250-837 • 增强子: 碱基 838-1385 • SV40 早期启动子: 碱基 2279-2648 • 潮霉素 ORF: 碱基 26626-3691 • pUC 原点: 碱基 4334-5007 • 卡那霉素 ORF: 碱基 5081-5896 ORF 插入位点 ...
由于插入的FLAG标签序列非常短小,无法用常规的双酶切方法进行鉴定,所以在设计Oligo DNA时就将BamHⅠ酶切位点最右端的一个碱基删除,这样插入FLAG后的载体无法再被BamHⅠ切开,可以方便地挑出阳性克隆。构建好的质粒转染HaLa细胞后,用抗FLAG抗体能够检测到FLAG-BTG2融合蛋白的表达。图6中除了FLAG-BTG2条带外,在其...
关键词:FLAG;融合标签;蛋白纯化;亲和常数 中图分类号:Q816 1. 引言 FLAG 标签是一类由亲水性的八个氨基酸残基 DYKDDDDK 组成的表位标记物,可融 合到目标蛋白的 N 端或 C 端,其序列简短,对目标蛋白的结构和生物活性影响小,且自身 含有肠激酶切割位点,可以在蛋白纯化后除去[1, 2]。抗 FLAG 单克隆抗体 M2...
关键词:新型荧光蛋白;重组FLAG标签;非竞争性ELISA;亲和常数;双功能融合蛋白 中图分类号:Q816 1引言 自1962年首次从多管水母属(Aequoreavictoria)中分离纯化出了GFP [1] ,在GFP的初级 氨基酸序列上,第65个至第67个氨基酸(Ser—Tyr—Gly)形成环状六肽三体,以共价形式 与GFP蛋白肽键骨架相连 [2,3] 。尽管GFP基...
注:克隆时须保持miniTurboID与诱饵蛋白的碱基序列在同一阅读框中,避免因移码突变导致的诱饵蛋白不表达。 4.检测诱饵蛋白表达、细胞定位和活性。 为获得最理想的实验效果,需选择适合的细胞类型用于3X Flag-miniTurboID融合诱饵蛋白的适度表达,3X Flag-miniTurboID融合诱饵蛋白的过量表达会导致假阳性的出现,因此在大规模...
1.06kDa。Strep-tag®系统是一种允许通过亲和层析纯化和检测蛋白质的方法。的Stre... FLAG-tag)一样,Strep-tag在其cDNA或基因的亚克隆过程中可以... 已知碱基序列长度怎么算原核表达产物蛋白大小 mRNA 上的碱基数除以3=氨基酸数 赛默飞: 蛋白表达和纯化产品 赛默飞提供优质的蛋白表达产品,覆盖哺乳动物,昆虫和细...
注:克隆时须保持AirID与诱饵蛋白的碱基序列在同一阅读框中,避免因移码突变导致的诱饵蛋白不表达。4.检测诱饵蛋白表达、细胞定位和活性。 为获得最理想的实验效果,需选择适合的细胞类型用于AirID-3X Flag融合诱饵蛋白的适度表达,AirID-3X Flag融合诱饵蛋白的过量表达会导致假阳性的出现,因此在大规模表达AirID-3X ...