Dextran是一种多糖,通常具有氢氧基官能团,用于与FITC反应。 活化FITC:FITC需要在活化步骤中与一些化学试剂一起处理,以形成FITC的活性衍生物,使其能够与Dextran反应。这通常通过将FITC与碳酸氢钠(NaHCO3)混合,使其发生碱解活化,形成FITC的异硫氰酸酯(isothiocyanate)。 FITC与Dextran反应:活化的FITC与Dextran分子中的氨...
1. 细胞器追踪：- 细胞染色：将FITC-dextran添加到细胞培养基中，使其进入细胞内。待一定时间后，用PBS缓冲液洗涤细胞，固定和染色，然后使用荧光显微镜观察FITC-dextran的荧光信号。根据FITC-dextran的定位和分布情况，可以判断其在特定细胞器中的位置。- 共定位染色：使用特定细胞器标记物（如抗体或荧光染料）与FITC...
CM-dextran 是一种通过羧甲基化修饰的葡聚糖,具有良好的水溶性和生物相容性。 羧甲基化增加了葡聚糖的负电荷密度,使其在生理条件下具有更高的稳定性和细胞摄取能力。 合成方法: 通常通过化学偶联反应,将FITC的异硫氰酸基团与CM-dextran的氨基或羟基反应,形成稳定的共价键。 具体步骤如下: 在碱性条件下,FITC的异...
1. 准备原料：包括FITC、PEG和Dextran等原料，其中FITC需要用NaOH溶液溶解成储备液，PEG需要用浓盐酸HCl溶液溶解成储备液，而Dextran则需要用超纯水溶解成储备液。2. 活化：将PEG储备液用NaOH溶液调节pH至8～9，加入适量的异氰酸酯(如OCN-HCl等)，搅拌均匀后静置活化一段时间。3. 偶联：将活化后的PEG储备液加入...
FITC标记蛋白方法 FITC,异硫氰酸荧光素,又称为荧光素-5-异硫氰酸盐,形态外观黄色粉末,有吸湿性,易溶于水和酒精溶剂,在避光干燥条件下可保存,是一种生化试剂。 它能与各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光,加酸后析出沉淀,荧光消失。通过在荧光显微镜下...
FITC标记葡聚糖(FITC-Dextran)是以天然葡聚糖B512F限制水解和分级纯化制备的不同分子量葡聚糖为底物,经荧光素标记所得的合成探针。荧光素基团通过一个稳定的硫代氨甲酰健连接到葡聚糖上,此标记步骤不会引起任何的葡聚糖降解。FITC-Dextran内每个葡萄糖单位含0.002~0.008 mol FITC,这一低水平的替换确保葡聚糖最小的...
FITC-Dextran的合成是将Fluorescein Isothiocyanate(FITC)共价偶联到Dextran分子上的过程。以下是一种常见的FITC-Dextran合成方法的概述: 合成步骤: 准备Dextran:选择适当分子量的Dextran,通常是Dextran 10,000 - 70,000,以满足实验的需要。Dextran是一种多糖,通常具有氢氧基官能团,用于与FITC反应。
FITC标记蛋白方法: (1)将待交联的蛋白(浓度≥1mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.6gNaHCO3,1.06gNa2CO3,7.36gNaCl,加水定容至1L。 (2)将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光。 (3)按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于抗...
定义:FITC-Dextran是将异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate, FITC)与葡聚糖(Dextran)通过共价键连接而成的化合物。 原理:基于FITC分子的荧光特性和葡聚糖分子的生物学特性,通过化学反应将两者结合,使葡聚糖在荧光显微镜下可视化。 二、制备方法 准备葡聚糖:选择适当分子量和浓度的葡聚糖作为起始物质。 激活FITC:...