1. 先调节阴性对照管,将原补偿清零。调节电压,使阴性群落在FITC和PE双阴性区。 2. 进行FITC单染管调节。在理想情况下,检测管中不应该出现PE信号。但在实际情况中,可能在FITC与PE的双阳性区出现荧光信号。这个信号是PE探测器检测到的FITC信号。此时,需要通过...
l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选,但是当细胞数量有限,无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低,阳性分群不明显不足以用来调节补偿时,建议选择补偿微球。补偿调节时要注意:l使用未染色的细胞做PMT的电压设置l不要使用未染色的补偿微球设置电压eBioscience提供两种补偿微球:OneCompeBeads...
如当我们同时检测四种荧光素FITC、PE、Per CP、APC,做补偿调节,需要以下的样本,无任何染色的样本,FITC, PE, Per CP以及APC单染阳性的样本,这里需要一共5个管子。 在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE, FITC-Per CP, FITC-APC, PE-Per CP,PE-APC, Per CP-APC,一共6个...
第三份标本——只标记PE-CD4抗体。图D是未调节时的FITC-PE散点图,从图中可见,FITC通道也接收到了PE荧光素所发射的荧光信号,为了消除FITC中PE的荧光信号所以需要设置FITC-PE补偿值。图E是正确调节FITC-PE补偿值后的FITC-PE散点图。图F是过度调节FITC-PE补偿值的散点图 第四份样本——同时标记FITC-CD8和PE-...
1. 观察两个单染管,发现 PE 单染管出现假阳性,需要补偿,下面进行自动补偿。 2. 选择空白管和两个单染管,拖进「Compensation」,然后点击类似于小山的图标。 3. 仪器默认会出现很多通道,可以删除自己不需要的。例如本次分析中只需要 7-AAD 和 PE,其余可以删除...
如果纵坐标是FITC，横坐标是PE。调节电压后，阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标（PE...
补偿调节时要注意：l使用未染色的细胞做PMT的电压设置l不要使用未染色的补偿微球设置电压eBioscience提供两种补偿微球：OneCompeBeads与UltraCompeBeads。微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿。每滴微球中都含有两群：一群是可以结合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。优...
补偿是双向的。荧光素FITC会溢出到PE, PE 也会溢出到FITC通道。 荧光素的溢出与否,溢出多少既与荧光素发射光谱有关,也与滤光片有关。 比如检测荧光素PE,在其他参数不变的情况下,如果将FITC通道的带通由原来的530/30更换为535/50(图3),则PE荧光素溢出至FITC通道的信号则会增多,反之亦然。
如果纵坐标是FITC， 横坐标是PE。调节电压后，阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标（PE）和纵坐标（FITC）的平均荧光强度值。电压调好以后，上单色阳性样本。比如上牌FITC阳性，这时不要再改变电压了，而是调节补偿系数，最终目的就是让FITC阳性的细胞都位于向下象限，并且该细胞团的纵坐标...
流式实验的三大要素是样本（细胞或颗粒）、流式细胞仪和荧光素偶联抗体，进而讲到了荧光素的选择问题，常见荧光素的特点。荧光素按激发光波长来分，主要是激发波长为375 nm、405 nm、488 nm和633 nm 4类，其中，常用的是激发波长为488 nm和633 nm的荧光素，如FITC、PE、APC、PI等。激发波长为488 nm的荧光素...