在流式细胞术或荧光标记实验中,FITC(异硫氰酸荧光素)、PE(藻红蛋白)和APC(别藻青蛋白)是三个常用的荧光通道。每个通道都有其特定的激发和发射波长,因此在选择染料进行配色时,需要确保所选染料的光谱特性与通道相匹配,并尽量减少荧光溢出和补偿问题。 FITC通道 推荐染料:FITC本身就是一种常用的绿色荧光染料,其激发波长为495n
1. 别藻青蛋白（allophycocyanin，APC）：APC最大发射波长为660 nm，其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪，检测通道一般是FL4通道。FITC、PE和APC搭配是经典3色搭配。2. Cy5：Cy5属于小分子染料，其最大发射波长为670 nm，其标记的抗体适用于所有配备633 nm氩离子激光器的流式细胞仪，检测通道一般...
1). FITC(Fluorescein)又称异硫氰酸荧光素,其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;FITC 的最大发射波长为525nm,在流式细胞仪的FL1通道检测。2). PE(R-Phycoerythrin)又称藻红蛋白,有R-PE和RD1的别称,其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;PE 的最大发射波长为...
1、FITC: 激发波长488nm,最大发射波长525nm。 1) 其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪; 2) 在流式细胞仪的FL1通道检测; 3) 可用于荧光显微镜技术 4) 荧光强度易受PH值影响,PH值降低时其荧光强度减弱。 2、Alexa Fluor 488: 激发波长488nm,最大发射波长519nm。 1) 其标记的抗体适...
由于光的发射波长不是一个具体值而是一个范围,所以会存在发射光谱「重叠」的现象,此时单个通道内可能检测出多个荧光基团的荧光从而造成「假阳性」现象,因此必须通过补偿进行修正,以确保所检测的荧光来自单一的荧光染料。 举个例子: PE 和 FITC 这两个通道是检测细胞凋...
单参数如FSC或FITC(FL1)可使用直方图,横轴表示荧光通道。纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量(如图5-1)。处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值,而且具有相同的信号密度。通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧,越靠右侧荧光亮度越强。 图5-1 流式数据分析图 双参数可在二维散点图中同时显示,X轴显示通道1...
单参数如FSC或FITC(FL1)可使用直方图,横轴表示荧光通道。纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量(如图5-1)。处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值,而且具有相同的信号密度。通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧,越靠右侧荧光亮度越强。 图5-1 流式数据分析图 双参数可在二维散点图中同时显示,X轴显示通道1...
因此,FITC选择488nm的激光器进行激发,选择525/40的滤光片进行检测。 以上为单激光检测,如果客户实验用到多色,需要考虑其它荧光对该通道的干扰。 鉴于不同流式细胞仪的配置不同,以Beckman的CytoFLEX三激光流式细胞仪为例,Elabscience®不同荧光染料最适激发光波长和荧光通道如下图所示:...
图2：Annexin V-FITC/PI（E-CK-A211）实验结果展示 03实验中需要注意的细节 a. 样本制备方面：（1）贴壁细胞要尽量使用不含EDTA的胰酶进行消化。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后，要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA。（2）比较难消化的细胞、组织等样本，可以分批次消化，避免先消化下来的细胞被过度消化，...
补偿是双向的。荧光素FITC会溢出到PE, PE 也会溢出到FITC通道。 荧光素的溢出与否,溢出多少既与荧光素发射光谱有关,也与滤光片有关。 比如检测荧光素PE,在其他参数不变的情况下,如果将FITC通道的带通由原来的530/30更换为535/50(图3),则PE荧光素溢出至FITC通道的信号则会增多,反之亦然。