ClonExpress ® II是新一代的重组克隆试剂盒,该试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase ® II。和上一代产品相比,Exnase ® II中添加了独特的重组增强因子。一方面,这种增强因子可以显著提高重组克隆效率,即便使用低效率感受态细胞(10 7 cfu/μg)也可实现高效克隆(100 cfu/ng Vector)。另一方面,E...
这种两端带有载体末端序列的 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase®II 重组酶的催化下,仅需反应 30 min 即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达 95% 以上。 一、无缝克隆实验步骤 ⑴ 线性化载体的制备 通过限制性核酸内切酶酶切载体使其线性化。 ⑵ 插入片段的获得: 将线性化载体末端15 - 20 bp...
载体酶切 依据对应的酶切体系进行酶切,琼脂糖凝胶电泳后回收目的条带。 获取目的基因片段 1) 引物设计和合成 2) PCR扩增目的基因片段 配置相对应的反应体系,轻轻混合均匀后置于PCR仪中进行反应,反应条件依据产物而定。琼脂糖凝胶验证PCR结构并回收产物。 PCR产物与载体进行同源重组 使用的重组酶(Exnase II)完成重组...
这种两端带有载体末端序列的 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase®II 重组酶的催化下,仅需反应 30 min 即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达 95% 以上。 组分 C112-01 (25 rxn) C112-02 (50 rxn) 5× CE II Buffer 100 μl 200 μl...