二、实验步骤 1. 包被(Coating) 原理:将捕获抗体固定在酶标板孔表面。 操作: 用包被缓冲液(如碳酸盐缓冲液,pH 9.6)稀释捕获抗体至合适浓度(通常1-10 μg/mL)。 每孔加入100 μL稀释后的抗体,4℃过夜孵育(或37℃孵育2小时)。 弃去液体,用洗涤缓冲液洗板3次(每次浸泡1-2分钟后甩干)。 2. 封闭(Blocking)
①用包被缓冲液将抗原稀释至1～10 μg/mL的蛋白质浓度。 ②在每个ELISA板孔中加入0.1 mL稀释后的抗原溶液,在4°C条件下过夜孵育。 ③次日,弃去孔内溶液,并使用洗涤缓冲液清洗板孔三次,每次3分钟(以下简称“洗涤”)。 2.封闭: ①向各板孔中加入0.1 mL的封闭液,并在37°C下孵育1小时。 ②随后进行洗涤以...
4️⃣ 一级抗体添加(间接或夹心ELISA):向各孔中加入对特定抗原有专一性的一级抗体,并孵育一段时间让其结合。5️⃣ 再次洗涤💦:移除未结合的一级抗体。6️⃣ 二级抗体添加✌️:仅适用于间接和夹心ELISA,在孔中加入与一级抗体具有专一性并带有酶标记的二级抗体。7️⃣ 再次洗涤🚿:再次洗去...
一、实验准备在进行ELISA实验之前，需要做好充分的准备工作。首先，要选择合适的抗体和抗原，确保它们的质量和特异性。其次，准备好实验所需的设备和试剂，如酶标板、酶标仪、洗涤液、底物等，确保它们的准确性和可靠性。二、样本处理在进行ELISA实验时，需要对样本进行处理，包括样本的采集、保存、稀释和加样等步骤。
间接法的主要实验程序:先用待测的病毒样品包被酶标板,是抗原吸附在微皿孔壁上;洗去多余的抗原及杂物,加入特异性的兔抗血清IgG(一抗);孵育后洗去未和抗原结合的多余抗体,加入酶标羊抗兔IgG(二抗);最后加入底物。如有颜色反应,证明抗原-特异性抗体-酶标二抗复合物的存在,从而确定病毒的存在。(新P151) ①取150ul...
ELISA 实验标准操作流程。哇，ELISA 实验可是生物学领域中非常重要的一项技术！它在疾病诊断、免疫研究等众多方面都发挥着关键作用。下面就来详细讲讲 ELISA 实验的标准操作流程。一、实验准备。1. 试剂准备。包被缓冲液：一般常用的是碳酸盐缓冲液，pH 9.6。准确称取适量的碳酸钠和碳酸氢钠，溶解于蒸馏水中，定容...
Elisa试剂盒(推荐上海威奥生物的) 移液枪和枪头 酶标仪 37℃烘箱 实验步骤大揭秘 🔍 试剂准备 🧪 细胞培养上清液配制:先把细胞培养上清液收集到无菌管里,然后用2000-3000rpm的速度离心20分钟,仔细收集上清液。 洗涤液配制:这个很简单,用蒸馏水1:20稀释就行了。
ELISA结果处理流程 以夹心法ELISA的数据处理为例：1. ELISA的样本通常要设置复孔进行检测，这样才能为结果的统计验证提供足够的数据。分别计算标准品、实验组样本的吸光度的平均值。复孔检测结果的变异系数（CV）不应超出20%。2. 建立标准曲线。以标准品浓度作横坐标、OD值作纵坐标，拟合曲线。（各类ELISA处理软件与...
实验操作 例如：Human IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit检测前试剂准备提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡到室温(18-25°C)。如果试剂盒需分多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条及标准品，剩余酶标板条和标准品需按指定条件保存。1.洗液：用去离子水或蒸馏水(推荐电阻率为18MΩ的超纯水)将30ml浓缩洗涤液...
将整个酶标板倒置在吸水纸上,轻轻拍板以去除残余液体。🔥 显色与终止: 按每孔100μL加入亲和素-HRP,盖板膜小心盖好酶标板,室温避光孵育30min。 孵育结束后,小心去除板盖膜,去除板内液体,用 Plate Washing 洗涤酶标板3次。 将整个酶标板倒置在吸水纸上,轻轻拍板以去除残余液体。