目前常用的ELISA方法有直接法、间接法、双抗夹心法、竞争法ELISA。 #01直接法 将抗原固定于ELISA板上,然后用酶标抗体直检测抗原。 相较于其他类型的ELISA实验,直接ELISA实验步骤少,检测速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反应,检测结果不容易出错, 但是由于直接ELISA的抗原不是特异性固定的,样本中的靶蛋白及其他杂质...
4. 间接法测抗体 此方法是检测抗体最常用的方法,原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体。此外,该方法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。 看完ELISA实验的技术方...
实际上,不管是哪一种ELISA,操作方法都离不开:①将抗原或抗体吸附到固相载体上;②加入待检样品以及后续试剂;③温育;④洗涤去掉游离未结合的反应物;⑤加入酶检测底物;⑥结果的判读。 方法图解 1. 双抗体夹心法测抗原:针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分...
一、直接法 在直接ELISA中,抗原或样品直接固定在板上,结合的检测抗体与目标蛋白结合。然后添加底物,产生与样品中分析物量成比例的信号。由于直接ELISA中仅使用一种抗体,因此其特异性不如夹心ELISA。 图片来源网络 优点:ELISA实验步骤少,检测速度快 缺点:由于只使用1种抗体,因此特异性较差。 如果样本中的所有蛋白质都...
二、Elisa实验标准操作方法1. 加样：分别设空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔和待测样本孔。在对照孔中分别加入各试剂1滴，空白孔加满底物溶液/洗涤液。余孔分别加待测样品5滴入孔，接夹心法加生物素标记的抗体及亲和素溶液各5滴入孔。2. 温育：用封口膜封板，37℃（或室温）温育30分钟。3. 洗涤：用洗涤液洗...
(1)双抗原夹心法:待测物为抗原,实验中使用两种针对抗原不同表位的抗体; (2)竞争法:待测物为抗体,与固定抗原竞争结合酶标抗体; (3)间接法:待测物为抗体,通过酶标记的二抗检测; (4)免疫共沉淀法:利用抗原抗体结合后形成的免疫复合物与底物结合。 4.各类ELISA实验方法的优缺点及应用场景 (1)双抗原夹心法:优...
双抗体夹心ELISA 此方法常用于检测抗原，将抗体固定在固相载体上，首先加入待测抗原与抗体特异性结合，随后加入酶标抗体检测并利用底物显色。优点：抗原无须事先纯化，进行操作时不需稀释。缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。04 双抗原夹心ELISA 反应模式与双抗体夹心法类似。将固相抗原和酶标特异性抗原分别...