保温的方式除有的 ELISA 仪器附有特制的电热块外,一般均采用水浴,可将 ELISA 板置于水浴箱中,ELISA 板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA 板应放在湿盒...
竞争ELISA既可用于检测抗体，也可用于检测抗原。以检测抗体为例，将抗原固定在固相载体上，首先加入待检抗体，再加入酶标抗体，则待检抗体就与酶标抗体竞争结合包被在固相载体上的抗原。通过洗涤洗掉未被竞争结合的酶标抗体，最后加底物显色，需要注意的是显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比。优点：可用于检测不...
1.原理:免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理,对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法,酶联免疫吸附分析(下称ELISA)是免疫分析的一种,分三个部分组成:免疫识别,信号输出和数据处理。 2.步骤:免疫识别是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗体,而后利用抗体识别待测的抗原(通常...
夹心ELISA:将捕获抗原的抗体(捕获抗体)附着在固相载体上,洗掉多余的未结合抗体后,添加抗原并被特异性捕获,通过直接ELISA或间接ELISA的形式检测抗原。这种组合进一步提高了检测的灵敏度和特异性,是最常见的ELISA实验形式。 图3 夹心ELISA步骤 源自RayBiotech官网 竞争性ELISA:在竞争性ELISA中,固定量的标记抗原与样品抗原(...
一、原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离...
-重复该步骤2-3次,以确保洗涤干净。 7.加入底物: -加入适合的底物。 -孵育一段时间,使底物与酶发生反应。 8.反应停止: -加入适当的溶液,停止底物酶反应。 9.测定信号: -使用光密度测定仪读取每个孔的吸光度。 -记录吸光度值,用于后续数据分析和定量结果。 三、ELISA的注意事项 -实验过程中需严格控制温度和...
实验时,需要将抗原或捕获抗体包被于固相载体上,通过检测分子(酶或荧光基团),将化学信号转换为电信号,以OD值或发光值的结果,对靶蛋白进行定量分析。具体原理:ELISA的基础是抗原或抗体的酶标记,利用结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或...
1.直接ELISA的原理及步骤: 直接ELISA方法适用于已知抗体,且目标物的抗原性较好的情况。该方法将特异性的抗原通过硫酸盐或其他方法固定于微孔板上,然后用荧光素标记的抗体与其结合,最后通过测量荧光素的荧光强度来进行定量测定。 步骤: 1)将抗原分散涂布在微孔板上,然后孵育,使其与货物绑定。 2)将非特异性结合位点...
ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的...