二、原理简述 1.单细胞分离:Drop-seq技术将单个细胞以液滴的形式悬浮在液相中。这些液滴相互之间互不相通,每个液滴内包含一个细胞。通过控制液滴的大小和数量,可以精确控制每个液滴内细胞的数目。 2.单细胞捕获:通过微流控技术,将液滴固定在特定的位置,使得液滴内的细胞能够被捕获在特定的微孔或微柱阵列中。每...
Drop-Seq是一种基于使用微流体技术的方法,通过将它们封装在微小液滴中进行平行分析,可以快速分析数千个单个细胞。 这些纳升级水性隔离室已用于微流体器件中的许多应用:纳米颗粒制造、乳液和泡沫、药物输送,但也作为PCR和逆转录的微小反应室。Drop-Seq使用液滴将细胞分隔成纳升大小的反应室,用于分析其mRNA转录物,同时...
原理简述 Drop-Seq基于液滴微流控技术,首先,将细胞悬浮液与带有分子条形码的微珠悬浮液泵至微流控芯片,汇聚并形成层流,之后再与油相汇聚,形成单分散的微滴,将每个细胞与一个微珠一同包裹于同一微滴中,随后完成RNA杂交并裂解微滴,释放mRNA杂交物,完成逆转录,最后,以PCR方式完成核酸扩增,并进行测序分析。 测序过程...
Drop-seq主要核心部件为增压装置及液滴微流控合成装置,原理利用压力将磁珠,细胞,矿物油三种材料,压到微通道里,实现三个物质混成一个大液滴完成单细胞分离标记,完成后续建库。 Drop-seq_tools分析流程 不同的实验方案生成的单细胞数据,分析上整体差别不大,无外乎就是原始数据过滤质控,然后比对到基因...
Drop-Seq是基于使用微流控技术快速分析数千个单个细胞的策略,通过将它们封装在微滴中进行并行分析。 这些纳升级水相室已被用于微流体装置中的许多应用:纳米制造,乳液和泡沫,药物递送,但也作为用于PCR 和逆转录的微小反应室 。Drop-Seq使用液滴将细胞划分为纳升级大小的反应室,用于分析它们的mRNA转录物,同时使用分子...
DROP-SEQ使用简单的微粒 1.从复杂的组织中制备单细胞悬液 一个复杂的组织被分解成单个细胞。 2.引物合成 微粒上的引物序列 每个微粒含有超过10的8次方个独立的引物,它们共享相同的“PCR处理”和“细胞条形码”,但具有不同的独特分子标识符(UMI)。实际上,PCR处理是在所有引物和珠子上相同的恒定序列,其允许STAMP形...
原文章中对Drop-seq建库流程的图示 (1)解离组织/细胞为单细胞悬液、准备beads、调试仪器 这一步在原理上没什么可说的,比如要收集白细胞,使用MACS磁珠过滤/红细胞裂解液就可以得到单个目标细胞悬液。如果有实际要做的需要,可以参考Cell文章附带的protocol进行。
测序原理 Drop-seq利用微流控装置将带有条形码的微珠和细胞一起装入微液滴。微液滴将细胞分割成纳升大小的反应室,条形码随后会连接到反转录后的cDNA上,由此检测数以千计的细胞。 Drop-seq A:“简单”微粒 B:水凝胶微粒 使用 1.细胞分离:从复杂组织中制备单细胞悬浮液。 2.引物(primer)合成:每个微粒(beads)上...
技术原理为Drop-seq技术*。该技术可在极短时间内同时获得数十万个单细胞转录组信息，而且相较于其他平台，成本大大降低。优势 高通量：一次可以得到数百至数万甚至更多细胞的转录组 低成本：每个细胞成本不超过10元 个性化：可根据客户分析需求提供个性化分析 一站式：从样品制备到数据深度分析一站式服务...