以0.1M PBS浸泡冲洗4-5次(换液:1次/hr)。将组织块入30%蔗糖/0.1M PBS液(4℃),1-2天后冰冻切片,将切片裱贴于原位杂交专用玻片上,切片厚度为15-20μm。 (二)探针制备与检测(定量): 1. 随机引物制备cDNA核酸探针以DIG DNA 标记检测试剂盒为例: (1)探针制备: ①模板DNA(0.5-3 μg) 15 μl,100...
Southern对DNA的质量要求比较高,一般来说,高质量DNA 样品需具备以下几点:① DNA 完整性好;② DNA 纯度高;③ 勿用TE 溶解DNA;④ DNA 浓度不低于0.7ug/ul,杂交需模板DNA 约20ug/泳道/次二、引物设计 三、DNA 检测 1、DNA浓度的测定DNA浓度用紫外分光光度计测定,核酸的光吸收值位于波长260nm处,蛋白质则位于2...
4.所谓DNA分子杂交,就是采用一定的技术手段,将两种生物的DNA分子的单链放在一起,如果这两个单链具有互补的碱基序列,互补的碱基序列就会结合在一起,形成杂合双链区,杂交的具体过程如下:(1)将DNA样品用某种酶降解。(2)用琼脂糖凝胶电泳进行分离,并浸泡在碱中使DNA变性。(3)将变性的DNA转移到硝酸纤维素膜上在80...
用标记的DNA或RNA操针与靶DNA杂交,洗去多余探针,经放射性自显影或显色反应确定同源靶序列在膜上的位置。固定于膜上的DNA与探针的杂交反应是一个多相反应,复性反应的速度以及杂交体的稳定性决定于反应的灵敏度和特异性。除膜上DNA本身的含量和探针的含量、大小以及靶DNA与探针之间的互补程度等内部因素外,杂交过程主...
2.DNA分子杂交的基础是,具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键,构成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前,先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来,再通过加热或提高pH的方法,将双链DNA分子分离成为单链,这个过程称为变性。然后,将两种生物的DNA单链放在一起杂交,其中一种生物的DNA单链事先用同位素...
DNA杂交实验是一种高度特异性的分子生物学技术,其核心原理在于利用核酸分子的变性和复性特性来实现特定序列的检测。这个过程依赖于探针,即已知序列的DNA片段,与待测核酸(如基因组DNA、细胞总DNA或总RNA)之间的碱基互补配对,形成杂交双链,即heteroduplex。这种双链可以在DNA-DNA或RNA-DNA之间形成,而...
在延伸反应中,每20~25 个核苷可有一个Dig-dUTP 分子掺入到新合成的DNA 链中。2、操作步骤1)探针标记注意:在探针标记前,必须用普通PCR 优化反应条件(试剂盒中提供了过量的Taq DNA聚合酶及其Buffer,建议用于条件优化),包括引物、退火温度、延伸时间、模板量等,设...
2021-01-15 12:11:58影视沧海 0:00/0:00 速度 洗脑循环 Error: Hls is not supported. 视频加载失败 影视沧海 2.7万粉丝分享经典影视剧 00:39最深沉的爱,莫过于分开后,我将自己活成你的样子 00:45百般乐器,唢呐为王,中国的文化将由年轻人传承 ...
Southern Blot DNA印迹杂交 实验全流程 一、DNA 的提取人和哺乳动物细胞基因组DNA的分离通常是在有EDTA、Sarkosye等一类去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚、氯仿抽提,经RNase 处理和纯化来提取DNA。 (1)取单层细胞,经无钙、镁PBS洗一次,用0.25%胰蛋白酶消化,细胞悬液经PBS洗2次,弃上清,取细胞沉淀。
一、实验原理用地高辛标记的HCV RNA探针检测HCV RT-PCR产物。二、实验步骤1. 处理:将尼龙膜浸泡于20×SSC中吸足液体后,夹在两层滤纸中37℃烘烤20-30 min。(将尼龙膜置入烤箱后立即进行下一步操作)2. 变性:【原理】 使DNA样品变性,即双链DNA→单链DNA。将待测DNA