染色质免疫沉淀技术(chromatinimmunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。 ChIP的一般流程: 甲醛处理细胞---收集细胞,超声破碎---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性...
其中ChIP-Seq可以真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白,是目前研究蛋白质-DNA互作的经典方法。 一、DNA-蛋白质互作——染色质状态和功能研究 在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作(DNA-Protein Interactions,DPIs)是至关重要的,参与基因的表...
问题一:ChIP-seq从样本准备到拿到测序结果整体流程是怎样的? 使用甲醛固定细胞,将DNA与蛋白质交联;裂解细胞、分离染色质,通过超声或酶处理将染色质随机切割;然后利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来;解...
CUT&Tag是蛋白-DNA互作的一大革新技术,它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀,而是通过针对靶蛋白(如转录因子、染色质重塑蛋白)的抗体和Protein A的介导,使得与Protein A融合的Tn5酶(Tagmentase)在切割DNA片段的同时在序列两端加上测序接头,经PCR扩增后形成可以直接用于高通量测序的文库(具体参考图1)。使用CUT&Tag,可以...
CUT&Tag技术发展历程 ChIP-Seq(Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(106-107),甲醛交联易导致假阳性或假阴性,对染色质的完整性、免疫沉淀抗体的特异性较为敏感,整体实...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagment)作为一种新兴的DNA蛋白互作研究技术,凭借其信噪比高,可重复性好,实验周期更快等优势,在植物以及动物细胞中的成功应用与科研文章的发表[1-2],受到广大科研工作者的信赖。 CUT&Tag是蛋白质与DNA互作研究的革新技术,其核心技术为pA/G-Tn5 Transposase,将Protein A/G与...
dna和蛋白质相互作用的技术 DNA和蛋白质之间的相互作用是生物学中一个重要的研究领域。科学家们利用各种技术来研究这种相互作用,包括: 1. 色谱技术:利用各种色谱技术来分离和纯化蛋白质和DNA分子。 2. 电泳技术:利用各种凝胶电泳技术来测定DNA和蛋白质的大小、电荷和形态。 3. 免疫共沉淀技术:利用特定的抗体来共...
这俩技术都是用来研究蛋白质和DNA之间是怎么互动的。 先说说ChIP吧,这技术就像是个侦探,专门用来找出蛋白质和DNA之间的“秘密约会”。具体来说,就是用抗体去“勾搭”特定的蛋白质,然后把它们连同它们“勾搭”上的DNA一起拉出来。这样,我们就能知道这个蛋白质喜欢和哪些DNA序列“约会”了。 但是,ChIP有个小缺点,...
染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)结合两种强大的技术,来研究蛋白质与DNA之间的相互作用。它具有灵敏度高和覆盖度高等特点,主要应用于转录因子结合位点、组蛋白修饰、基因组甲基化以及核小体定位等研究。 顾名思义,整个操作分为两部分。首先是通过染色质免疫沉淀技术(ChIP)特异性地富集与目标蛋白结合的DNA片段,并对其进行...
分析复合体关系。DNA-蛋白互作技术如EMSA、竞争实验、足迹实验、甲基化干扰实验等，分别用于检测DNA与蛋白质结合、精确序列部位、DNA保护区域和甲基化影响。ChIP技术则揭示转录因子与DNA的序列信息，Southwestern杂交则用于研究DNA结合蛋白的性质。这些方法共同推动了生物学研究的深入理解。