ChIP 的一般流程是:甲醛固定细胞---收集细胞,将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA 复合物相互结合---加入Protein A 或 Protein G 微珠,结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA 复合物---解交联,纯化...
蛋白质与DNA互作主要包括组蛋白、转录因子、DNA甲基化酶和染色质重塑复合物等。为研究蛋白质-DNA互作,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseⅠ足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母杂交、ChIP-Seq等。其中ChIP-Seq可以真实、完整地反映结合在DNA序...
以CST 备受欢迎的CUT&RUN试剂盒#86652为例:首先将细胞固定在伴刀豆球蛋白A磁珠上,然后用洋地黄皂苷通透细胞膜,加入一抗和pAG-MNase(Protein A-Protein G-微球菌核酸酶),一抗募集pAG-MNase到靶蛋白上,0度条件下添加Ca2+激活pAG-MNase,并切割靶蛋白两侧的DNA,...
凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。 ▲ 凝胶...
目前共有三种应用广泛的蛋白-DNA互作研究技术,我们称之为蛋白-DNA互作三驾马车,它们分别是:ChIP、EMSA和双荧光素酶实验。今天我们来聊聊该系列最后一种-双荧光素酶报告基因实验(luciferase Assay)。说双荧光素酶报告基因实验前先来看看荧光素酶报告基因。
CUT&Tag是研究蛋白和DNA互作的新兴实验方法,该方法是通过蛋白特异性抗体引导Protein A-Tn5酶在目标蛋白结合的DNA位置进行切割并且在序列两端加上测序接头,经过PCR扩增后形成可以用于高通量测序的文库,随后对文库进行测序分析从而解析与目标蛋白结合的DNA片段。
分子间互作实验的类型 根据作用的分子类型(DNA、RNA和蛋白),可以将分子间互作分为以下: ①蛋白质-蛋白质:如免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(CO-IP)、GST pull-down、Far-Western Blotting ②蛋白质-RNA:如RIP、RNA pull down ③蛋白质-DNA:如染色质免疫共沉淀技术(ChIP) ...
DNA Pull down实验是用脱硫生物素标记特异性DNA探针,脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合。提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;用 Western Blot或质谱对产物进行检测分析。
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和DNA序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。 我们可为您提供的EMSA实验服务,基于biotin标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合原理,通过设计合理、科学的实验方案,为您提供验证性的EMSA,竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super...
分子互作是生命体的普遍主题,分子互作技术作为生命科学的基础技术现已广泛应用于生命科学研究的方方面面。 EMSA原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验 (electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA 结合蛋白和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析( HellmanLM and Fried MG, 2007) 。