根据MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）的指导方针，qPCR为Quantitative real-time PCR的简称，RT-qPCR指的是Reverse transcription–qPCR，RT-PCR仅用来表示Reverse transcription polymerase chain reaction，而不是Real-time PCR，但是有少数作者并没有坚持这一原则。
10-100µL、20-200µL、100-1000µL)(3)1.5mL 无菌无酶低吸附离心管(4)无菌无酶八联管或 96 孔 qPCR 板二、操作流程:1、操作详细步骤:(1)qPCR 反应液的制备:①根据所需检测的参考品和待测样品数量(一般做 3 组复孔),分别计算反应所需孔数:反应孔数=(...
https://www.youtube.com/watch?v=iu4s3Hbc_bw&ab_channel=Henrik%27sLab欢迎加入我们这一次的科学探索之旅,深入了解定量PCR(qPCR)技术——现代生物科学领域的一项核心技术。在本视频中,我们将逐步展示qPCR如何精准地量化样本中的DNA,解析其在病毒检测(如COVID-19)中
qPCR MIX(红盖):将干粉4000rpm离心1min,加入1275μl复溶缓冲液,缓慢吹吸混匀,避免产生气泡,分装后储存-15~-25℃,避免反复冻融,使用前冰上融化后吹吸混匀。 阳性对照溶液PC(绿盖):将干粉4000rpm离心1min,加入300μl无核酶水震荡混匀,瞬时离心后,分装储存于-15~-25℃,避免反复冻融,实验时稀释100倍使用。
QPCR是一种快速、准确、可重复的技术，可以用来检测基因表达的变化，广泛应用于基因表达调控的研究中。1. RNA提取和反转录：首先需要从细胞或组织样品中提取总RNA，使用反转录酶将RNA转录成cDNA。RNA提取和反转录过程需要注意样品的质量和纯度，以保证实验结果的可靠性。2.引物设计：选择合适的引物是QPCR实验的重要步骤...
qPCR,即Quantitative Real-time PCR,是一种在DNA扩增反应中,通过荧光化学物质来实时监测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。简单来说,它就是通过内参或者外参法来对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。 🔍 检测方法: SYBRGreenⅠ法:使用SYBR Green荧光染料来标记双链DNA。 TaqMan探针法:利用特异性...
在实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）中，DNA的污染可能导致实验结果的不准确性和不可靠性。因此，避免DNA污染是确保qPCR实验成功的关键步骤之一。本文将深入探讨在qPCR实验中避免DNA污染的重要性，并提供一系列实用的技巧和建议，以确保实验结果的高质量和可靠性。一、无菌实验技术的重要性 引言无菌技术： 无菌实验技术...
定量PCR(qPCR)是一种在PCR反应中实时监测核酸扩增产物的方法。到底使用RNA还是DNA? RNA更能反映gene的表达水平 依据中心法则,细胞内的DNA序列首先被转录成RNA分子,特别是信使RNA(mRNA),随后mRNA携带遗传信息,用于指导蛋白质的合成。mRNA的丰度和多样性是衡量基因表达水平的关键指标,它们直接关联到特定基因在特定时间和...
优化的PCR缓冲体系与混合酶的组合,有效抑制了非特异产物的产生,能够显著提高PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高 保存条件运输条件 -20℃冰袋运输 DNA-qPCR 反应液 (UNG)
两者之间关系的建立是qPCR用于定量的依据。 2主要仪器 表2仪器信息表 名称 厂家 型号 实时定量PCR仪 Bio-Rad CFX Connect 3主要试剂 表3试剂信息表 名称 厂家 规格 残留DNA样品制备试剂盒 ABI 1)Lysis Buffer,2 bottles,50ml/bottle; 2)Binding Solution,1 empty bottle; 3)Wash Buffer Concentrate, 2 bottles...