在体外诊断中,H&E染色可以显现细胞的基本结构,免疫组化(IHC)可以揭露某个特定分子在组织中的分布,而FISH,则可以更进一步揭示更为微观的变化,如病原体、染色体异常等。 FISH探针的标记与探针 FISH探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。直接标记是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸共价结合,而间接标记是用生物...
Wiegant等和Heng等首先利用化学方法对染色体进行线性化,再以此为载体进行FISH,使其分辨率显著提高,这就是最初的纤维-FISH。纤维-FISH应用各种不同技术,将待研究细胞的全部遗传物质即DNA在载玻片上制备出DNA纤维,用不同颜色荧光物质标记的探针与DNA纤维杂交,在荧光显微镜下观察结果并进行分析。 纤维-FISH的关键就在于制...
该探针主要以橙色荧光分子标记TOP2A基因区域和绿色荧光分子标记CEP17基因区域制备而成。如图所示 临床意义 已有研究表明,在许多人类恶性肿瘤中,异常高的TOP2A活性导致了许多人类恶性肿瘤的高水平增值率,并与患者生存期缩短相关。TOP2A的改变是决定蒽环类药物辅助治疗人类乳腺癌增加疗效可能性的重要预测因素,因此TOP2A靶向蒽环...
FISH的检测过程主要包括玻片标本的制备、标本的预处理、探针和标本的变性、原位杂交、杂交后洗涤、复染和荧光显微镜观察信号及分析,一般在24 h内完成检测。FISH探针的类型有很多,在目前的染色体FISH分析中,直接、多色荧光标记的DNA探针逐渐成为临床检验工作者的首选,其可以在同一标本中同时检测出多种染色体异常。相较于...
而图C的大面积异常的带型,也并非是制备样品时把几条染色体黏在一起了。在荧光显微技术,以及荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)发展起来之后,我们终于明白,原来这里面蕴藏着大量的原癌基因拷贝。 比如说上图这个肿瘤细胞系,我们用DAPI(蓝色)来染DNA,用红色的FISH探针来染原癌基因EGFR,用绿色...
本发明公开了一种用于FISH探针标记的BACDNA的快速制备方法,包括(1)裂解菌体获得澄清裂解液;(2)利用超声波进行DNA打断;(3)采用离心柱法回收纯化DNA.本发明采用超声波破碎取代了限制性内切酶的酶切步骤,省略了酶切前DNA纯化步骤,利用超声波直接将细菌澄清裂解液中超螺旋的BACDNA打碎成10kb以下的双链线性DNA,再使用...
1q21基因扩增检测探针,主要以红色荧光分子标记1q21 DNA区域为探针,约640Kb,使其于癌细胞核内的1q21基因序列杂交互补。由于D13S319 DNA标记区域位于13q14,因此具有极高的特异性,不会与其他染色体着丝粒杂交产生杂点。如图所示 临床意义 1q21的扩增与MM的浸润表型相关,预后差,随着疾病进展1q21增加的机率和拷贝数都...
利用FISH进行DNA序列的定位具有实验周期短、灵敏度高、分辨率高、直观可见等优点。 总的说来,FISH技术的发展沿着两条路线前进:一方面是采用不同的探针,从而衍生出许多FISH新技术,如Muticolor-FISH、CGH、GISH、CISS、BAC-FISH、Chromosome Painting、Rreverse Chromosome Painting等等;另一方面则是努力提高FISH技术的分辨率...
◆探针在科研中的应用 在Northern印迹中,通过凝胶电泳将待测的RNA分离。然后将分子转移到膜上和标记探针一起温育。互补序列的杂交使得RNA的靶序列变得直观。Southern印迹涉及到将DNA分离和转移到膜上。然后将膜与标记好的DNA探针一起温育。互补序列的杂交使得DNA靶序列变得直观。涉及到ISH和FISH实验的其他应用,可以在细...