其中ChIP-Seq可以真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白,是目前研究蛋白质-DNA互作的经典方法。 一、DNA-蛋白质互作——染色质状态和功能研究 在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作(DNA-Protein Interactions,DPIs)是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎...
问题一:ChIP-seq从样本准备到拿到测序结果整体流程是怎样的? 使用甲醛固定细胞,将DNA与蛋白质交联;裂解细胞、分离染色质,通过超声或酶处理将染色质随机切割;然后利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来;解...
染色质免疫沉淀技术(chromatinimmunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。 ChIP的一般流程: 甲醛处理细胞---收集细胞,超声破碎---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性...
DNA和蛋白质之间的相互作用是生物学中一个重要的研究领域。科学家们利用各种技术来研究这种相互作用,包括: 1. 色谱技术:利用各种色谱技术来分离和纯化蛋白质和DNA分子。 2. 电泳技术:利用各种凝胶电泳技术来测定DNA和蛋白质的大小、电荷和形态。 3. 免疫共沉淀技术:利用特定的抗体来共沉淀蛋白质和DNA分子,从而研究...
在ChIP-seq 实验中,使用甲醛使蛋白质与DNA 交联,之后将染色质片段化,并用靶蛋白特异的抗体进行免疫沉淀;最后对蛋白质进行消化,并对留下的 DNA 片段进行测序。这项技术让研究人员能够验证很多以往无法证实的科学问题。 ChIP-seq 实验可以用来检测组蛋白修饰的水平或反映...
DNA-蛋白互作技术 1.EMSA:凝胶迁移实验 【实验目的】检测DNA与蛋白质的是否结合 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA:electrophoreticmobility shift assay)用于在体外研究DNA或RNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 在凝胶电泳中,由于电场的作用,裸露的DNA分子向正电极移动距离的大小是同其分子量的对数成反比。如...
DNA-蛋白质互作研究新技术CUT&Tag介绍, 视频播放量 0、弹幕量 0、点赞数 0、投硬币枚数 0、收藏人数 0、转发人数 0, 视频作者 景杰生物, 作者简介 景杰生物助力蛋白质组学驱动精准医学,相关视频:
染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)结合两种强大的技术,来研究蛋白质与DNA之间的相互作用。它具有灵敏度高和覆盖度高等特点,主要应用于转录因子结合位点、组蛋白修饰、基因组甲基化以及核小体定位等研究。 顾名思义,整个操作分为两部分。首先是通过染色质免疫沉淀技术(ChIP)特异性地富集与目标蛋白结合的DNA片段,并对其进行...
研究人员也采用各种显微技术来探索DNA-蛋白互作,包括光学、荧光、电子和原子力显微镜,后两者提供了最高的空间分辨率,不过,电镜仅限于静态观察,而不能分辨动态相互作用。 原子力显微镜(AFM)可以说是多功能的显微方法。它利用微悬臂感受和放大悬臂上微小针尖与受测样品原子之间的作用力,从而达到检测目的,具有原子级的分辨...
分析复合体关系。DNA-蛋白互作技术如EMSA、竞争实验、足迹实验、甲基化干扰实验等，分别用于检测DNA与蛋白质结合、精确序列部位、DNA保护区域和甲基化影响。ChIP技术则揭示转录因子与DNA的序列信息，Southwestern杂交则用于研究DNA结合蛋白的性质。这些方法共同推动了生物学研究的深入理解。