ChIP 的一般流程是:甲醛固定细胞---收集细胞,将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA 复合物相互结合---加入Protein A 或 Protein G 微珠,结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA 复合物---解交联,纯化...
其中ChIP-Seq可以真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白,是目前研究蛋白质-DNA互作的经典方法。 一、DNA-蛋白质互作——染色质状态和功能研究 在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作(DNA-Protein Interactions,DPIs)是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎...
GST-pulldown技术主要用于研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用,可以验证两种已知的蛋白质可能存在的直接相互作用或者寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知靶蛋白,且体外验证蛋白直接相互作用时有较强的特异性。 GST pull-down的基本原理是将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽琼脂糖磁珠上,作为与目的蛋白亲和...
以CST 备受欢迎的CUT&RUN试剂盒#86652为例:首先将细胞固定在伴刀豆球蛋白A磁珠上,然后用洋地黄皂苷通透细胞膜,加入一抗和pAG-MNase(Protein A-Protein G-微球菌核酸酶),一抗募集pAG-MNase到靶蛋白上,0度条件下添加Ca2+激活pAG-MNase,并切割靶蛋白两侧的DNA,使其从基因组中释放出来,扩散到上清中。上清中的DNA...
CUT&Tag是研究蛋白和DNA互作的新兴实验方法,该方法是通过蛋白特异性抗体引导Protein A-Tn5酶在目标蛋白结合的DNA位置进行切割并且在序列两端加上测序接头,经过PCR扩增后形成可以用于高通量测序的文库,随后对文库进行测序分析从而解析与目标蛋白结合的DNA片段。
这里有几个常用的技术值得推荐:首先是ChIP-Seq/PCR,这是一种能够直接检测体内蛋白质与DNA结合情况的方法;其次是EMSA实验,通过体外模拟的方式观察两者之间的相互作用;还有荧光素酶报告基因实验,则是…
一、DNA pull-down简介 DNA pull-down技术是一种用于研究蛋白质与DNA之间相互作用的实验方法。其原理基于蛋白质与特定DNA序列之间的亲和性,通过特定的DNA探针捕获与其结合的蛋白质,从而实现对蛋白质-DNA复合物的富集和分析。 二、DNA pull down实验步骤
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和DNA序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。 我们可为您提供的EMSA实验服务,基于biotin标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合原理,通过设计合理、科学的实验方案,为您提供验证性的EMSA,竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super...
在生物体内，DNA-蛋白质互作主要通过各种蛋白质与DNA结合，形成复合物来实现。这些蛋白质包括转录因子、DNA修复酶、DNA结合蛋白等，它们通过特异性识别DNA序列与之结合，参与调控基因表达、DNA修复和复制等重要生命活动。实验方案的设计需要考虑以下几个关键步骤：首先，选择特定的DNA序列或片段作为研究对象，这...
实验中，滤膜结合分析法通过测定蛋白质与DNA结合后的滤膜通过性变化，间接反映蛋白质与DNA的结合情况。EMSA技术通过观察特定DNA序列在蛋白质存在与否下迁移率的变化，快速筛选蛋白质结合位点。DNase Ⅰ足迹法和固定DNA模板上的外切核酸酶Ⅲ足迹法则分别通过DNA片段的降解情况，揭示蛋白质结合的精确位置和范围。