DH5α 化学感受态细胞——转化 1)取感受态细胞置于冰浴中融化,待完全化冻后轻轻混匀。如需分装,可将融化的细胞悬液转移到无菌、预冷的离心管中,置于冰浴中备用。混匀、分装时动作应轻缓,以防细胞破裂。 2)向50~100微升细胞中加入目的DNA,轻轻混匀,冰浴中放置30min。注意:加入的体积以不超过感受态细胞体积的...
制备DH5α的感受态细胞并进行转化 一.制备DH5α的感受态 (1)将DH5 菌液在无抗的LB平板上划线,37℃过夜培养 (2)从平板上挑单菌落,接种于5mlLB液体培养试管中,37℃过夜培养 (3)按照1:100的比例吸取菌液接种于250ml摇瓶中(含100mlLB培养基)中,37℃,200rpm振荡培养2.5小时。在600nm下测其OD值达到0.4-0.6...
使用pUC57质粒检测该DH5a感受态细胞,转化效率可达107～108。在-70℃下保存数月转化效率不发生明显降低。操作方法:1.取出感受态细胞,置于冰上5分钟,解冻。2.向感受态细胞中加入1～10μl连接产物,轻弹离心管底部混匀,冰上放置30 min。3.置于42℃热激60s后,迅速置于冰上急冷2分钟。4.向热激完毕的感受态细胞中,...
(1)为制备转化效率较高的感受态细胞,可将保种液用于制作感受态细胞。 (2)注意挑取LB固体培养基上湿润,圆滑的克隆,以防挑取杂菌。 (3)进行二次培养的时候,摇床转速应选择较低转速,空载转速在100-150 rpm/min左右。 (4)制作感受态的过程中尽量冰上操作,操作的动作尽量轻柔,稳健;试验中所用的试剂,转子,离心机需...
Top10感受态 (E. coli) 和 DH5α感受态细胞是常用的大肠杆菌细胞系，用于基因克隆、高效表达和蛋白质产量增加等研究。虽然它们都是常用的实验室细胞系，但它们在一些关键方面存在区别。下面是对它们的优缺点进行详细对比描述说明：优点比较：1. 转化效率高：Top10 具有非常高的转化效率，适用于高效转化难以处理的 ...
在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物二聚体,这是为什么?应该可以排除PCR设定条件的问题,因为跟我同组的人都P出来了,就我没有目的条带. 相关知识点: 试题来...
大肠杆菌DH5a感受态细胞转化率的改进 系统标签: 转化率细胞大肠杆菌感受活细胞改进 大肠杆菌DH5α感受态细胞转化率的改进桓明辉摘要:针对实验材料E.coliDH5α,对该茵株在不同生长时期的转化效率进行测定,确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案。结果表明:在细...
DH5a 电转化感受态细胞简要说明:CMbio-DH5α电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。 CMbio-DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒 DNA 的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证 了插入 DNA 的稳定性;lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝...
摘要:针对实验材料E.coli DH5a,对该茵株在不同生长时期的转化效率进行测定,确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案.结果表明:在细茵的生长繁殖过程中,其转化率有很大变化;得到了E.coil DH5a茵株制备感受态细胞的最佳条件. 关键词:大肠杆茵;感受态;转化率 ...
大肠杆菌DH5a感受态细胞转化率的改进.pdf,维普资讯 2008年 3月 韶关学院学报 ·自然科学 Mar.2O08 第29卷 第3期 JournalofShao~anUniversity·NaturalScience Vo1.29 No.3 大肠杆菌 DH5a感受态细胞转化率的改进 刘静华,包英华,陈燕飞 (韶关学院英东生物工程学院,广东