以下是使用DCFH-DA进行活性氧检测的详细步骤: 📖 准备DMSO储备溶液:将DCFH-DA溶解在DMSO中,制备成1-10mM的储备溶液。未使用的DMSO储备溶液应等分到单次使用的小瓶中,并储存在-20℃,避光保存。 💧 制备工作溶液:将DCFH-DA储备溶液稀释至1-10μM的工作浓度,根据经验确定最佳浓度。 🌿 孵育细胞:从生长培养基...
DCFH-DA 10mg 50mg 250mg 说明书 1份保存:-20℃避光干燥保存,有效期2年。 有机溶剂如DMSO储存液需分装成单次用量后,-20oC避光保存,避免反复冻融。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。以下步骤是来源于大量文献总结的简易操作流程,仅作参考。用户需根据特定的应用和敏感性来做调整。 将低温保...
【染色原理】 DCFH-DA本身没有荧光,但可以自由穿越精子细胞膜。进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。DCFH不能通透细胞膜被标记到细胞内。在过氧化氢存在的条件下,DCFH被氧化生成荧光物质DCF,经488nm激光激发呈绿色荧光(发射波长500-530nm),同时死亡精子与PI染料结合发红色荧光。可用于评估精子的氧化损伤...
必须根据经验确定最佳工作浓度。 3.从生长培养基中取出细胞,将染料工作溶液(来自步骤2)加入细胞中,并在室温或37℃下孵育细胞5至60分钟。 4.去除染料工作溶液;用预热的HBSS洗涤,加入预热的HBSS或生长培养基,在最佳温度下孵育。最佳恢复时间可以广泛变化,因为一些细胞类型通常表现出低水平的酯酶活性。 5.在将细胞暴露...
1. 按照1:1000-2000用无酚红无血清培养基稀释DCFH-DA。 2. 去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。 3. 加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于96孔板每孔加入100-200 μL染色液,六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。
细胞内的ROS可以通过荧光成像或流式细胞术使用荧光探针DCFH-DA,脂质ROS可通过C11-BODIPY等检测。ROS的荧光强度与铁死亡呈正相关。下面给大家分享两种探针的具体使用方法。 DCFH-DA使用方法 1、装载探针 对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺...
3. （可选步骤）如果需要，使用ROS 不敏感的荧光素染料 DCFDA 作为阳性对照，与H 2DCFDA 探针一起使用。染色方法与H 2DCFDA 相同。 注意事项 1. 在实验开始前，产品应以高浓度贮存，并保持密封。2. 实验中，在预热的PBS 、HBSS 或HEPES 等其他简单的生理缓冲液中加入该产品，推荐工作浓度为1-10 μM 。
DCFH-DA介绍:DCFH-DA 化学名:2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(也称为:2',7'-二氯荧光素二乙酸酯)可以被细胞酯酶水解为 2',7'-二氯二氢荧光素(也称为 2',7'-二氯荧光素)和 然后主要被 H2O2 氧化成 2',7'-二氯荧光素。 2',7'-二氯二氢荧光素...
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。 如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
产品名称:精子活性氧类物质(ROS)DCFH-DA染色液(荧光染色法) 编号:BRED-032 规格:40T/盒 胞质内H2O2靶向探针,检测结果准确,报告活精子ROS水平,检测数据更具临床意义。 询价 产品操作视频 产品编号:BRED-032 包装规格:40测试/盒 试剂用途: 1、不育症病因分析;辅助生殖不良结局原因分析;低质量精液参数查因; ...