成熟的DC细胞形态多样。细胞表面伸出树枝样突起, 形态不规则,长短及粗细不一, 细胞形态有的呈叶状, 有的呈星状, 细胞大而透亮。培养注意事项 DC的培养时间较长, DC逐渐由贴壁生长变成半悬浮, 悬浮状态生长。当DC开始半悬浮及悬浮生长后, 换液时吸走的培养液中会带走一定量的DC, 可将其离心后，再置于培养液中继续培养, 避免DC
②DC分化吸出预接种OP9细胞的培养基，并用200 μl CD34+细胞悬浮液（3000个细胞）替换，继续培养；第6天，每个孔中取出100 μl培养基，并用100 μl预热的DC分化培养基（αMEM, 10% FBS, 1% penicillin-streptomycin, 100ng/ml Flt3L, 20ng/ml SCF, 20mg/ml GM-CSF）替换；在第12-21 天收获细胞，并...
CIK细胞和DC细胞是细胞免疫治疗的2个重要组成部分,两者联合可确保高效的免疫反应。 【培养原理】 1.DC培养用细胞因子: 1.1 GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子) GM-CSF是一种造血生长因子,在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成,并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。 GM-CSF是最早...
DC细胞培养攻略 1973年,美国Rockeller大学Steinmen和Cohn首先从小鼠脾细胞的分离中发现了表面具有很多树枝状的突起的细胞,将其命名为:树突状细胞(dendritic cell,DC)。DC细胞作为免疫前线的指挥官,是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞,一个DC细胞能够激活100-3000个T细胞,是巨噬细胞和B细胞的100-1000倍[1]。
由于DC细胞的样本来源以及诱导方法也比较庞杂,在这里我们举三个例子: 1) 人骨髓CD34+细胞诱导生成DC[5] ①饲养层细胞OP9的培养和接种 a、OP9细胞在75cm2培养瓶中培养至密度为4×103-1×104细胞/cm2, OP9培养基(αMEM,20%FBS,青霉素-链霉素),37°C,5%CO2; ...
1) 人骨髓CD34+细胞诱导生成DC[5] ①饲养层细胞OP9的培养和接种 OP9细胞在75cm2培养瓶中培养至密度为4×103-1×104细胞/cm2, OP9培养基(αMEM,20% FBS,青霉素-链霉素),37°C,5% CO2; 收获OP9细胞,将2-3 ml胰蛋白酶-EDTA溶液加入培养瓶中,37℃消化5-15分钟,在倒置显微镜下观察细胞层,直到细胞变圆...
1) 人骨髓CD34+细胞诱导生成DC[5] ①饲养层细胞OP9的培养和接种 a、OP9细胞在75cm2培养瓶中培养至密度为4×103-1×104细胞/cm2, OP9培养基(αMEM,20%FBS,青霉素-链霉素),37°C,5%CO2; b、收获OP9细胞,将2-3mL胰蛋白酶-EDTA溶液加入培养瓶中,37℃消化5-15min,在倒置显微镜下观察细胞层,直到细胞变...
2.10 培养至第7天，轻柔吹打培养基，收集悬浮细胞及疏松贴壁生长的细胞，即为未成熟DC细胞。2.11 室温下，1000rpm离心10mins，弃上清。用培养基重悬，计数后调整密度至1*106个/ml，加入24孔板培养板中，分别补充脂多糖(LPS,1μg/ml)、TNF-α(250U/ml)或CD40L(1μg/ml)，继续培养48h后，收集悬浮细胞及...
树突状细胞(Dendritic Cells,DC)广泛分布于血液、肝、脾、淋巴结及其他非免疫器官组织中,是目前已知递呈功能最强的抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells, APC),也是唯一能刺激初始T细胞反应的APC,在免疫…
DC细胞是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells, APC),它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,未成熟DC具有较强的迁移能力,成熟DC能有效激活初始型T细胞,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。 由于PBMCs中DC细胞数量过少,DC细胞培养过程中,会先是贴壁状态,后面状态改变,可能会变为半悬浮状态...