作者通过CRISPR-Cas9基因编辑平台开发了高光学纯度的L-乳酸生产菌株。此外,通过定向进化选育的高性能菌株(NCBIO01-M2- ldhL1-HT)可以在45℃的高温下高效生产L-乳酸。该菌株在开放式发酵中以高的初始葡萄糖浓度产生了221.0g / L的L-乳酸。另外,L-乳酸的生产率和转化率分别高于7.5g / L / h和0.96g / g,...
乳酸脱氢酶基因的克隆,分离获得了 ldb0101,ldb0813,ldb1010, ldb1147 和 ldb2021 五种同工酶基因,并分别构建重组质粒转化大肠杆菌 JM109,实现 D- LDH 同工酶基因的表达.结 合重组大肠杆菌的摇瓶发酵实验和 D-乳酸的合成,初步确定 D- 乳酸脱氢酶 Ldb0101 和 Ldb1010 在保加利亚乳杆菌 中对 D-乳酸的合成起...
的技术方案:从乳杆菌MD-1中提取基因组DNA,构建有D-乳酸脱氢酶基因的重组载体,D-乳酸脱氢酶克隆载体;克隆载体转化到大肠杆菌中,得到重组微生物.在本发明完成的基础上,可以进一步研究D-乳酸脱氢酶基因的缺失,那么,缺失D-乳酸脱氢酶基因的乳杆菌MD-1将可以发酵生产高光学纯度的L-乳酸,从而可以大大降低L-乳酸的生产...
1.一种D-乳酸脱氢酶基因编码的蛋白质,其特征在于,氨基酸序列由序列表中序列1所示。 2.一种编码权利要求1所述蛋白质的基因。 3.如权利要求2所述的基因,其特征是所述核苷酸序列包含在序列表中序列2所述的核苷酸序列中。 4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物。 5.权利要求1所述蛋白...
摘要 本发明公开了一种突变的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)D-乳酸脱氢酶(PLDHMut),其氨基酸序列由现有D-乳酸脱氢酶(PLDH)的Tyr52点突变为Leu而成;提供了该PLDHMut的基因,以及含有该基因的表达载体和基因工程菌株。本发明还提供了制备该重组的PLDHMut的方法,该重组酶产量高。本发明PLDHMut及其重组酶可...
为了更好的催化丙酮酸还原生成L—乳酸,科学家在瑞士乳杆菌中采用基因工程技术用L—乳酸脱氢酶(ldhL)基因替换了D—乳酸脱氢酶(ldhD)基因,构建了一株稳定的无ldhD活性的菌株,从而使ldhL基因含量增加。该过程会用到的工具酶最可能是( ) A. 限制酶和DNA连接酶 B. DNA酶和RNA酶 C. DNA聚合酶和蛋白酶 D. 胰...
该方法包括如下步骤:将表达所述基因的所述重组表达载体导入宿主细胞,表达得到上述蛋白,即为D-乳酸脱氢酶。 本发明的再一个目的是提供一种利用所述蛋白生产D-苯基乳酸的方法。 该方法包括如下步骤:将所述蛋白、苯基丙酮酸、和NADH(或NADPH),在27-35°C(如30°C),pH5.0-6.0(如pH5.5)的条件下反应,得到D-苯基...
摘要:本申请提供了D‑乳酸发酵菌株的驯化筛选方法和D‑乳酸脱氢酶基因的检测方法。D‑乳酸发酵菌株的驯化筛选方法包括以下步骤:1制备驯化培养基和鉴别分离培养基;2分别称取青、黄贮饲料,在无菌环境下放入装有驯化培养基的离心管中,35.2℃条件下连续培养24小时;3取出培养箱中的离心管,吸取培养液放入另一新的装...
本发明公开了一种新型水稻D-乳酸脱氢酶(OsD-LDH)及其编码基因与应用,属于植物生物工程领域。新型水稻D-乳酸脱氢酶是细胞色素C依赖的D-乳酸脱氢酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;该D-乳酸脱氢酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的OsD-LDH基因在植物体内参与胁迫条件下产生的丙酮醛代谢,可用于提高...
利用PCR的方法从假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides 1159)的DNA中扩增得到D-乳酸脱氢酶基因,构建重组克隆质粒(pMD19-T-DLDH),转化DH5α进行蓝白斑筛选,得到阳性克隆提取质粒双酶切验证.连接pET-32a表达质粒,构建重组表达质粒,提取质粒双酶切、测序验证,测序结果与原序列基本相符.得到重组表...