CUT&Tag-qPCR方案目前做CUT&Tag-qPCR时，有两种，一种是蛋白酶K消化和gDNA提取后直接qPCR实验，一种是完成建库后进行qPCR。这两种方式都有文献可参考。目前翌圣更推荐完成建库后进行qPCR实验。qPCR 定量检测 qPCR试剂以翌圣的Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix（Cat#11184）为例。反应体系...
(1)CUT&Tag技术进行qPCR检测 事实证明,CUT&Tag实验所获取的DNA片段可以进行qPCR以检测目的条带的富集情况。CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转...
目前做CUT&Tag-qPCR时,有两种,一种是蛋白酶K消化和gDNA提取后直接qPCR实验,一种是完成建库后进行qPCR。这两种方式都有文献可参考。目前翌圣更推荐完成建库后进行qPCR实验。 qPCR 定量检测 qPCR试剂以翌圣的Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix(Cat#11184)为例。 反应体系(推荐冰上配制) ...
(1)CUT&Tag技术进行qPCR检测 事实证明,CUT&Tag实验所获取的DNA片段可以进行qPCR以检测目的条带的富集情况。CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转座体孵育...
CUT&Tag研究思路研究结果A-C：LSD1和H3K4me2信号都在TSS区域富集D：PMSG引起表达上调/下调的基因与LSD1和H3K4me2所调控的基因重叠，以及重叠基因的KEGG注释和富集结果E-I：CUT&Tag、ChIP-qPCR和RT-qPCR结果显示，LSD1和H3K4me2都直接结合到Atg16l2启动子，LSD1缺失导致Atg16l2表达增加J-M：CUT&Tag、ChIP-...
(2) Qubit或者QPCR对测序文库浓度进行定量 4、上机测序 库检合格后，加入适当比例的平衡文库，进行Illumina HiSeq测序。测序的基本原理是边合成边测序（Sequencing by Synthesis)。在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dNTP...
(1)CUT&Tag实验结果进行qPCR分析 事实证明,CUT&Tag实验所获取的DNA片段可以进行qPCR以检测目的条带的富集情况。CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转座体孵育—片段化—DNA提取—qPCR检测。整个实验流程不超过10小时。
CUT&Tag Pro试剂盒(Vazyme #TD904)在不同细胞投入量的293细胞中对组蛋白H3K4me3体系进行了CUT&Tag-qPCR实验,本试剂盒可兼容100 - 100,000细胞,在低细胞投入量下仍有良好表现。对于不同丰度的靶点我们也对多个目的基因设计了引物进行检测,相较于阴性对照IgG,实验组中目的基因均有显著富集。
请注意,你不能对CUT&RUN文库进行qPCR,因为片段太短。请参见下面的阳性对照选项。 如果你没有已知的蛋白质靶点,可以设置一个阳性对照ChIP。组蛋白H3或H3K4me3通常效果非常好。由于大多数转录起始位点(TSS)上都存在大量的H3K4me3,你可以设计针对管家基因启动子的引物。如果你能检测到良好的信号,至少可以知道你的实验方法...
(1)CUT&Tag实验结果进行qPCR分析 事实证明,CUT&Tag实验所获取的DNA片段可以进行qPCR以检测目的条带的富集情况。CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转座体孵育—片段化—DNA...