创新的工作原理、优化的方案和试剂盒的组分允许以Z小化的非特异性背景水平捕获靶蛋白/DNA复合物,并快速构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以便以较小的偏差和高分辨率映射靶蛋白-DNA相互作用区域。 艾美捷CUT&Tag试剂盒特点: 1、高浓缩: 使用独特的核酸切割酶混合物,其具有低序列偏倚,以同时片段化染色质并切...
图6. CUT&Tag酶切片段分布,转录因子/组蛋白修饰的酶切片段分布呈现周期性; 图7. reads密度分布图,reads在TSS附近呈现明显的富集; 图8. 功能元件分布图Peak在基因功能元件上分布; 图9. Peak可视化; 总结 探索CUT&Tag技术的过程是精确而系统的,从样本制备到文库构建,每一步都需严格把控。选择新鲜的样本、适当...
http://www.vazyme.com/product/279.htmlCUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法,通过将Protein G或Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶融合,形成兼具双重活性的新型融合酶(Hyperactive pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase),在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附
文库生成后,成功的文库制备质量应通过TapeStation 或 Bioanalyzer来评估。一个理想文库的片段大小大部分是低于500 bp的。我们建议使用KAPA文库定量试剂盒测定文库浓度。 Q11 CUT&Tag是否需要像ChIP-Seq一样的Input对照? 不需要。 Q12 哪些抗体已经通过CUT&Tag-IT™ Assay Kit验证? 查看Active Motif完整的CUT&Tag-IT...
为了评估ATAC-seq和CUT&Tag文库，建议在文库扩增后使用DNA片段分析仪，如安捷伦TapeStation系统与D1000 Screen Tap Assay或安捷伦Bioanalyzer与DNA 1000 Chip检查片段分布。电泳图显示了片段大小和峰形，推荐选择分辨率小于1000bp的检测方法。ATAC-seq文库质检 真核生物染色质的基本结构单位是核小体，由147bp的...
ATAC-seq和CUT&Tag的文库通常从完整的细胞核或完整的细胞中制备,转座体通过核膜或细胞膜进入到染色质内部进行转座反应,并将测序接头序列与片段化的DNA相连接。 这种可及性会受到细胞类型、细胞数量、细胞活性、细胞结团以及转座体与DNA的相对浓度的影响,其结果可能使得文库片段的数量和大小存在很大的差异。所以我们的...
(1)CUT&Tag技术进行qPCR检测 事实证明,CUT&Tag实验所获取的DNA片段可以进行qPCR以检测目的条带的富集情况。CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转座体孵育...
CUT&Tag建库原理及实验流程 本试剂盒使用了Protein A/G融合的Tn5转座酶，该融合蛋白能与抗体结合，并在目的靶标附近切割DNA，从细胞中回收DNA后直接进行PCR扩增即可完成文库构建。试剂盒内组分均经过严格的质量控制，保证产品稳定性和可重复性。图1 CUT&Tag建库原理及实验流程 CUT&Tag系列产品 ABclonal针对不同客户...
3、就地标记:在DNA纯化之前,将DNA接头珠上连接(就地)到染色质,可以增加DNA片段大小,允许对结合转录因子(TF)的过短片段(例如:<70碱基对)进行纯化,以构建文库。 4、Z小背景:在原位切割目标蛋白/DNA复合物两端的未结合DNA序列,能够Z小化免疫捕获/测序背景,允许数据分析时读取数少于1000万次。
就地标记:在DNA 纯化之前,DNA 接头与染色质的磁珠上连接(原位)会导致 DNA 片段大小增加,从而可以纯化与转录因子 (TF) 结合的极短片段(例如:< 70 bps)用于文库构建。 最小背景:在靶蛋白/DNA 复合物的两 (2) 端原位切割未结合的 DNA 序列,可实现最小的免疫捕获/测序背景,从而允许< 1000 万个读数进行数据分...