CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白（ChiTag），其中Protein AG能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时，首先将细胞与磁珠混合，然后进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)主要用于研究特定蛋白质与基~因组DNA的相互作用。与传统的ChIP-Seq技术相比,CUT&Tag具有更高的信噪比、更少的样本需求和更简单的操作流程,使其在基~因调控机制、细胞分化研究以及疾bing标志物发现等领域具有广泛的应用前景。CUT&Tag技术的优势在于其高效的文库构建和...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)主要用于研究特定蛋白质与基~因组DNA的相互作用。与传统的ChIP-Seq技术相比,CUT&Tag具有更高的信噪比、更少的样本需求和更简单的操作流程,使其在基~因调控机制、细胞分化研究以及疾bing标志物发现等领域具有广泛的应用前景。CUT&Tag技术的优势在于其高效的文库构建和...
实验样品：棉花 抽提细胞核流程图 Tips：1.如果样品少，可以不进行过滤操作；2.抽提完细胞核后，可以无缝衔接CUT&TagAssay Kit (pAG-Tn5) for Illumina (RK20265);试剂配方:Nuclearisolation buffer A (10 mM Tris pH 8.0, 10 mM KCl, 0.5 mM spermidine)50 mL for one sample;Nuclearisolation buffer...
图1 CUT&Tag实验流程图 (Kaya-Okur et al., 2019)。 CUT&Tag的优势 作为表观遗传学领域的研究热点,DNA-蛋白质互作最常用的技术为ChIP-seq,然而ChIP-seq技术存在样本量大、信噪比低、背景信号强和分辨率低等缺陷。目前已有多篇文献对CUT&Tag技术和ChIP-seq技术进行了详细的对比性实验,验证了CUT&Tag技术的优势...
图1. CUT&Tag技术原理示意图 CUT&Tag和ChIP 技术的实验原理类似,均利用抗体与目标蛋白特异性结合来富集与之相互作用的DNA片段。CUT&Tag技术的核心是将Tn5转座酶进行改造,融合proteinA/G(形成pA/G-Tn5融合蛋白),其优点是特异性强,灵敏度高,背景噪音较低,重复性好,并且对样本要求量少。现在,CUT&Tag已成为组蛋白...
图2.CUT&Tag实验流程图。 二、CUT&Tag数据展示 Henikoff等通过传统ChIP-Seq、CUT&RUN、CUT&Tag三种方法对K562细胞中组蛋白修饰H3K27me3进行研究,结果显示,在相同的数据量(8M Reads)情况下,三种方法的染色质景观相似,但ChIP-Seq的...
图2 CUT&Tag、CUT&RUN、ChIP-Seq 实验结果对比:CUT&Tag 具有更好的信噪比和更低的背景。(见文献) 图3左图:CUT&Tag、CUT&RUN、ChIP-Seq 三种方法分析 H3K4me1 组蛋白修饰:CUT&Tag 在识别染色质特征时最有效,能够给出 ChIP-Seq 无法读出的信息;右图:peak...
本文建立了一种敏感的G4-CUT&Tag方法，用于高分辨率和特异性的天然G4s全基因组分析。二 、材料与方法 1. 材料 （1）HEK293T细胞 （2）带有His-tag的Flag-BG4抗体 2.方法：见图1 图1 CUT&Tag实验流程 三 、实验结果 1. G4-CUT&Tag技术的信噪比及分辨率高于ChIP-seq技术 与G4 ChIP-seq相比，G4-CUT&...
图4 | 组蛋白H3K4me3的CUT&Tag质检图 CUT&Tag样本要求 1、样本类型：细胞系、组织 2、送样要求：（1）细胞系：细胞数10-10个左右（细胞数越多结果越好），冻存送样，冻存前细胞活率需>90%，注明样本种属，细胞系种类，无支原体污染；说明：虽然该方法最低可使用100个左右细胞开展实验，但是如果客户提供细胞...