CUT&RUN的高分辨率能够提供关于这些转录因子与DNA结合位点的精确信息,尤其是在异染色质区域,它们可能参与调控特定的基因表达模式。 -优势:由于CUT&RUN能够精确地捕捉转录因子与DNA的结合,并且具备较低的背景噪声,它在研究这些关键因子的结合位点和作用机制时表现优异。 利用CUT&RUN分析小鼠胚胎脑中H3K27me3, Ezh2 (P...
以CST 备受欢迎的CUT&RUN试剂盒#86652为例:首先将细胞固定在伴刀豆球蛋白A磁珠上,然后用洋地黄皂苷通透细胞膜,加入一抗和pAG-MNase(Protein A-Protein G-微球菌核酸酶),一抗募集pAG-MNase到靶蛋白上,0度条件下添加Ca2+激活pAG-MNase,并切割靶蛋白两侧的DNA,使其从基因组中释放出来,扩散到上清中。上清中的DNA...
CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca²⁺激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。 图1:CUT&RUN实验原理 3. CUT&RUN实验流程 那么接下来我们将详细讲解CUT&RUN的实验...
CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca²⁺激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。 CUT&RUN实验流程: 1. 收获细胞并和beads结合: 收获细胞,并且进行细胞计数,推荐起始...
CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca²⁺激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。 CUT&RUN实验流程: 1. 收获细胞并和beads结合:...
CUT＆RUN（核酸酶靶向切割和释放）是一项用于在细胞天然染色质环境下检测蛋白-DNA相互作用的强大通用技术。这种测定方法可用于检测与基因组某个特定区域有关的多种蛋白，或相反，用于检测与某种特殊蛋白有关的基因组的多个区域。此外，CUT&RUN技术可用于明确某种特殊蛋白-DNA相互作用的空间和时间关系。例如，CUT＆RUN...
核酸酶靶向切割和释放 (CUT&RUN),与染色质免疫沉淀 (ChIP) 检测一样, 是一项用于在细胞天然染色质环境下检测蛋白-DNA 相互作用的强大通用技术。该技术自2020年问世以来,以所需细胞量少、背景低、易操作等多种优势,被广大科研工作者所青睐,也收到了来自终端用...
CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca??激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。 CUT&RUN实验流程: 1. 收获细胞并和beads结合:...
CUT&RUN试剂盒检测原理: 图1. EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒的工作流程。 图2. 使用EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒进行目标蛋白质/DNA富集: 通过控制抗体(抗H3K9me3和抗RNA聚合酶II,EpigenTek)从100,000个Jurkat细胞中捕获组蛋白/DNA复合物。非免疫IgG作为对照。富集的DNA被纯化并通过荧光定量以比较富集倍数...
核酸酶靶向切割和释放 (CUT&RUN),与染色质免疫沉淀 (ChIP) 检测一样, 是一项用于在细胞天然染色质环境下检测蛋白-DNA 相互作用的强大通用技术。该技术自2020年问世以来,以所需细胞量少、背景低、易操作等多种优势,被广大科研工作者所青睐,也收到了来自终端用户的操作细节问题及经验,今天天特别共享给大家。 本文...