CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca²⁺激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。 图1:CUT&RUN实验原理 3. CUT&RUN实验流程 那么接下来我们将详细讲解CUT&RUN的...
-CUT&RUN-qPCR:尽管CUT&RUN技术可能需要额外的优化步骤,但其高灵敏度和低背景噪声使得其在许多情况下成为理想的替代方案。总体上,CUT&RUN的实验成本可能较高,但在需要高分辨率数据的研究中是值得的。 -传统ChIP-qPCR:ChIP-qPCR是一种成熟的技术,通常在实验设计和优化方面更为成熟,但在某些应用场景下可能无法提供与...
🌱 CUT&RUN技术原理CUT&RUN的原理与ChIP相似,适用于研究组蛋白修饰、转录因子、染色质修饰酶以及其他DNA结合蛋白在基因组上的结合位点。关键区别在于,CUT&RUN通过抗体靶向和核酸酶原位切割,将目的蛋白结合的DNA从染色质上切割并释放出来。其主要步骤包括:1️⃣ 细胞通透化:首先将细胞通透化,以便抗体能够进入细胞...
直至Henikoff实验室提出CHIP新技术核酸酶靶向切割和释放(cleavage under target and release using nuclease,CUT&RUN),刷新了人们对DNA和蛋白研究方法的认识。 艾美捷CUT&RUN 技术的基本原理: CUT&RUN技术的核心在于利用核酸酶的特异性切割。在这种方法中,首先将目标蛋白(通常是转录因子或组蛋白修饰)与核酸酶(如Tn5转座...
cut run是一种新近发展的染色质免疫共沉淀技术,其原理是通过特异性抗体识别靶标蛋白,并利用酶切作用将其与染色质分离,然后使用qPCR来定量分析目标基因的丰度。在cut run实验中,引物的设计是确保实验成功的关键。 在进行cut run实验前,需要确定目标基因的序列。这可以通过数据库查询或测序技术来获取。在得到目标基因...
670 1 44:16 App 【蛋白课堂】四大层析原理介绍 友情提示:为了您的体验,点击作品信息、UP主个人空间、点赞、收藏、转发、相关推荐等位置会打开/下载Bilibili客户端。这些功能与账号相关,仅在APP内提供服务。信息网络传播视听节目许可证:0910417 网络文化经营许可证 沪网文【2019】3804-274号 广播电视节目制作经营许可...
CUT&RUN文库构建实验操作演示(HD102), 视频播放量 1086、弹幕量 1、点赞数 16、投硬币枚数 3、收藏人数 16、转发人数 6, 视频作者 诺唯赞, 作者简介 离5万粉丝还有亿点点的科研搭子 官网:https://www.vazyme.com/ TEL:400-600-9335 ,相关视频:化学实验操作(合),CUT&
与ChIP 相比,CUT&RUN 的优点不仅仅体现在实验流程的简化,更体现在性能的提升,如转录因子成功率高、抗体兼容性强、富集效果好以及信噪比高等(图 3)。 图2 CUT&RUN 技术原理 [1] 图3 CUT&RUN-seq 和 ChIP-seq TSS 富集效果的比较 [1] CUT&RUN 技术在发育生物学、肿瘤发生机制等方面的研究都有着出色的发挥...
1)实验原理 CUT&Tag是蛋白质与DNA互作的革新技术,无需通过甲醛交联以及免疫共沉淀,其核心技术为pA/G-Tn5 Transposase,将Protein A/G与Tn5转座酶进行融合,使得与抗体结合的同时,Tn5切割核小体上缠绕的DNA片段,获得目的序列。 图2. CUT&Tag原理图 2)实验流程 ...