CRISPR/Cas9系统是当前最流行的基因编辑工具之一。 Cas9属于RNA引导的DNA核酸酶,是天然原核免疫系统的一部分,赋予细菌对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抗性。在细胞内,Cas9核酸酶与引导RNA(gRNA)形成复合物,…
为了将分级CRISPRi系统应用于其他基因,作者使用HiBiT标签系统跟踪量化蛋白丰度。HiBiT标签是一个11个氨基酸的长肽,能够与萤火虫荧光素酶结合产生生物发光,对细胞造成的代谢负担可以忽略不计,并将其应用于报告基因mScarlet-I。此外,作者针对不同靶点构建不同gRNA的质粒文库组合,产生一个或两个报告基因被强烈抑制的组合,或...
我院孙东昌教授课题组致力于CRISPR系统的基础与应用研究,前期发现核结合蛋白StpA调控大肠杆菌I型CRISPR系统的新机制(Sun et al., Appl Environ Microbiol, 2022)。近期,通过将来自大肠杆菌的I型CRISPR系统整合至枯草芽孢杆菌中,结合转录和翻...
CRISPRi 技术原理:CRISPR 干扰(CRISPRi)是一种基于 CRISPR - Cas 系统的基因表达调控技术。它不依赖于核酸酶对 DNA 的切割,而是通过将失活的 Cas 蛋白(dCas)与转录抑制因子融合,使其在 gRNA 的引导下结合到目标基因的启动子或转录起始位点附近,从而阻碍 RNA 聚合酶与 DNA 的结合,抑制基因转录,实现对基因表达...
Cas12i系统自身就可以完成对pre-crRNA的成熟,具有多重基因编辑的潜力;相对于CRISPR Cas9和Cas12a,Cas12i分子量较小,体内递送具有一定优势。CRISPR Cas12i亚型在基因编辑应用上具有很大的潜力。 2020年9月7日,来自美国普渡大学的畅磊福研究团队利用冷冻电镜技术解析了多种不同状态的Cas12i与crRNA和dsDNA底物复合物的...
dCas9-KRAB CRISPRi慢病毒载体系统主要包含gRNA表达载体和dCas9-KRAB表达载体两部分，设计基因抑制实验时仅需构建gRNA表达载体。这一系统的优势在于不改变内源基因组背景，能实现高水平的基因抑制效果，适用于多种转录本的抑制，并且具有较高的特异性，几乎无脱靶现象。然而，dCas9-KRAB CRISPRi系统在基因...
⾼效、可控、灵活!上海⽣科院赵国屏王⾦改造新型CRISPRi系统iNature CRISPRi是在CRISPR编辑⽅法的基础上开发的⼀种⾼效、简便的基因转录调控技术，其在细 胞⽣物学和功能基因组学等领域有很好的应⽤前景。⽬前，CRISPRi对特定基因特定靶点的基 因转录抑制效率往往是恒定的，不能对靶基因实现精确转录...
CRISPR-Cas系统(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats and CRISPR-associated)是一种在细菌和古细菌中发现的、由RNA介导的抵御外源核酸入侵的“获得性免疫系统”。目前发现的CRISPR-Cas系统主要分成两大类(Class1、Class2)。其中,Class 1可细分为3个类型 (type I,type III 和type IV),其共同特...
为了阐明除ACE2以外的受体和蛋白酶在SARS-CoV-2感染中的功能,该研究通过使用过表达ACE2的iPS(ACE2 iPS)和CRISPRi系统抑制了BSG、CTSB和TMPRSS2基因的表达水平,并设计了针对这些基因的sgRNA。用表达sgRNAs、mKate2和抗病毒基因的质粒电转染iPS,...
5.一种CRISPRi基因抑制系统,其特征在于,所述CRISPRi基因抑制系统包含:dCas9表 达盒和sgRNA表达盒;其中:所述dCas9表达盒包括dCas9基因及其上游的第一启动子,所述 第一启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,所述sgRNA表达盒包括编码所述sgRNA的核 苷酸序列及其上游的第二启动子,所述第二启动子的核苷酸序列如...