CRISPRi是什么?CRISPRi研究案例 CRISPRi也称为CRISPR干扰 (CRISPR interference or inhibition) 。dCas9与转录抑制子连接,如KRAB(Kruppel associated box),dCas9-KRAB融合蛋白在gRNA指引下,结合到靶基因TSS位点,抑制转录起始,沉默靶基因的表达。 图3. CRISPRi系统示意图。图片来自: ACS Chem Biol. 2018 Feb 16;13...
CRISPRi 的特点: Genotype-Phenotype的关联是研究基因功能和相关疾病治疗的基础问题。Loss-of-function (LOF) 实验,通过干扰正常的基因表达后观察相应的表型是解析基因功能的金标准。始于2000年的RNAi和近年来众多实验室普及的CRISPR/Cas9是实现基因沉默的两种主要工具,这里简单介绍。 RNAi 与 CRISPR/Cas9用于功能基因筛选...
CRISPRi是CRISPR/Cas9的衍生，通过dCas9与sgRNA结合阻断转录，实现剂量调控的基因调控，而不像CRISPR/Cas9那样导致基因敲除（图3）。尽管两者都可用于LOF研究，RNAi侧重于成熟mRNA，而CRISPRi在转录初始阶段就发挥作用。RNAi的特点包括快速敲减、靶点预测简单、多种投递方式兼容，但siRNA可能结合到非目标序列；...
3. CRISPRa/CRISPRi(基因激活与基因抑制) i. dCas9-PVPR系统介绍 ii. dCas9-VP64/GI/SAM基因激活系统介绍 iii. 基因编辑招募系统介绍(Suntag/Moontag) 4. CRISPR系统的‘另类’应用(循环打靶) 5. CBE系统的原理及其应用 i. CBE系统进化过程总结(CBEmax/每代优化的元件及策略汇总) ii. 基因组CBE编辑(植...
CRISPRi也称为CRISPR干扰 (CRISPR interference or inhibition) 。dCas9与转录抑制子连接,如KRAB(Kruppel associated box),dCas9-KRAB融合蛋白在gRNA指引下,结合到靶基因TSS位点,抑制转录起始,沉默靶基因的表达。 图3. CRISPRi系统示意图。图片来自: ACS Chem Biol. 2018 Feb 16;13(2):406-416. ...