该研究设计了一种氨基酸球菌属Cas12a (AsCas12a) 变体,即多重转录干扰 AsCas12a (multiAsCas12a),其中包含 R1226A,这是一种通过 DNA 切口稳定核糖核蛋白-DNA复合物的突变。与DNase失活的AsCas12a-KRAB融合相比,multiAsCas12a-KRAB 融合可提高慢病毒递送 CRISPR RNA (crRNA)构建体中 CRISPRi活性。研究表明,...
1类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌当中最为常见,所占比例在所有已鉴定CRISPR-Cas基因座中高达90%。2类CRISPR-Cas系统包括剩余的10%几乎只存在于细菌中,并组装成一个核糖-核蛋白复合物,由crRNA与Cas蛋白组成,crRNA包含靶向特定DNA序列的信息。 目前所流行的Cas9与...
cas12a可用于DNA的高灵敏度检测、基因编辑、转基因等应用。crRNA设计决定了其靶向性，继而影响其应用效果。但非特异性切割也需要在应用设计中加以控制。Cas12a切割机理如下:1. cas12a是一个多功能蛋白，含有双链DNA结合域和核酸酶域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以非特异性切割DNA。2. crRNA是处理过的RNA分子...
1、舒桐生物可提供多种高纯度、高活性的Cas12a蛋白: 2、Cas12a的crRNA设计服务,利用生信预测并筛选脱靶效率低的靶点 3、HPLC纯化级别的crRNA合成服务,高纯度的crRNA有利于提高编辑效率 4、Cas12a蛋白的开发和PAM鉴定服务 (1)原核PAM鉴定 (2)真核PAM鉴定 (3)体外PAM鉴定 5、Cas12a蛋白活性检测服务 (1)真核细胞...
1、设计crRNA,使其Spacer与DNA靶序列互补,提交给IDT定制合成crRNA; 2、将crRNA与Cas12a蛋白混匀,形成RNP; 3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核; 4、通过crRNA的Spacer识别DNA靶序列,通过Cas12a蛋白识别PAM序列,对DNA进行剪切; 5、对DNA断裂处进行修复 ...
crRNA 设计中不要包含 PAM 序列。正确crRNA序列的示例如图3所示。 输入 20–24 碱基的目标序列后,订单输入系统将自动添加额外 20 个碱基和必要的修饰,总共 40–44 个 RNA 碱基。这些额外的碱基和修饰是构建一个完整的 Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 所必需的。该系统还会将最终序列转化为 RNA——请仅...
艾迪基因专注于发展和优化基于CRISPR/Cas的基因组编辑技术，技术团队通过自主开发的Fish-bait纯化工艺，获得了性能更好的Cas12和Cas13基因编辑蛋白，并开发了特有的crRNA设计逻辑。由此建立了FASST检测技术，大大提高了Cas酶切割活性和CRISPR检测的灵敏度。酶活性对比图 LbCas12a活性对比测试 LwaCas13a活性对比测试 ...
Cas12b是一个可根据crRNA指导进行DNA切割的RNP复合体。在靶DNA的指导下，其核酸酶域会被激活并进行DNA内切，实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具，crRNA的设计决定了其特异性。但是其附带切割效应也使非专属性信号放大成为可能,这需要在应用中加以考量。Cas12b与Cas12a是两种不同的DNA...
研究人员在这项研究中主要运用了以下关键技术方法:通过数据库挖掘和 circRNA 测序(circRNA-Seq)筛选 circRNA 生物标志物;利用 RT-RCA 对目标 circRNA 进行等温预扩增;设计双 Cas12a 蛋白(LbCas12a 和 FnCas12a)与多重 crRNA 组成 DCMC-CRISPR 系统进行检测;从辽宁癌症医院及研究所获取 22 例 OC 患者和 28 例...
2、所设计的crRNA的有效性和特异性检测。制备了重组的Cas12a蛋白和不同的crRNA，针对每种细菌的两种crRNA通过了最初的测试。为了提高检测灵敏度，这两种物种特异性的crRNA随后被组合在每个cas12a依赖的检测反应中。3、等温ERA与CRISPR/Cas12a相结合，可以敏感地检测到微量的 DNA。足够数量的底物DNA是CRISPR/Cas12a检测...