三、sgRNA质粒的构建方法 1、酶切载体 LentiCRISPR-V2质粒有两个BsmBI酶切位点，通过使用BsmB内切酶I，我们能够打开所需的区域。酶切条件遵循内切酶说明书，随后进行胶切、回收并备用。2、寡核苷酸链引物退火 体系：退火参数：37℃ 30 分钟，95℃ 5 分钟，然后以每分钟降低5℃的速度将温度降到25℃ 3、连接 体...
注意:sgRNA的设计严格按照设计原则进行,需考虑所有候选靶点的序列、位置、正负链、GC含量、潜在的脱靶位点。 三、sgRNA质粒的构建方法 1、酶切载体 LentiCRISPR-V2质粒有两个BsmBI酶切位点,通过使用BsmB内切酶I,我们能够打开所需的区域。酶切条件遵循内切酶说明书,随后进行胶切、回收并备用。 2、寡核苷酸链引物退火 ...
2.载体线性化后,验证酶切效果。lentiCRISPRv2 质粒长度为 14873 bp,酶切后电泳图上可产生约 2kb 片段。弃掉这个片段,将大片段使用 QIAquick Gel 纯化回收 (见 1)。2 为原始质粒,隐约的三条带显示了质粒的三种状态:超螺旋,环形分子,线性分子。 3.将合成的 oligo ...
上海禾午生物科技有限公司供应P2260-pLentiCRISPRV2基因编辑质粒供应产品,一、载体构建的基本实验步骤(1)目的DNA片段和载体的制备;(2)目的DNA片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)克隆筛选。(5)测序验证及结果交付二、详细内容1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大
注意:sgRNA的设计严格按照设计原则进行,需考虑所有候选靶点的序列、位置、正负链、GC含量、潜在的脱靶位点。 三、sgRNA质粒的构建方法 1、酶切载体 LentiCRISPR-V2质粒有两个BsmBI酶切位点,通过使用BsmB内切酶I,我们能够打开所需的区域。酶切条件遵循内切酶说明书,随后进行胶切、回收并备用。 2、寡核苷酸链引物退火 体系:
三、sgRNA质粒的构建方法 1、酶切载体 LentiCRISPR-V2质粒有两个BsmBI酶切位点,通过使用BsmB内切酶I,我们能够打开所需的区域。酶切条件遵循内切酶说明书,随后进行胶切、回收并备用。 2、寡核苷酸链引物退火 体系: 退火参数: 37℃ 30 分钟,95℃ 5 分钟,然后以每分钟降低5℃的速度将温度降到25℃ ...
大家好!今天我们来聊聊如何构建CRISPR/Cas9质粒。首先,我们选择了一个名为Lenti-v2的质粒作为backbone,这是张峰老师实验室开发的。构建方法采用的是同源重组技术,具体步骤可以参考之前的笔记哦。酶切位点的选择是关键,我们使用了BsmBI-v2酶,它的反应温度是55℃。这个酶有两个切割位点,分别位于U6 promoter和gRNA scaff...
英文名称:lentiCRISPR v2 纯度:原核抗性Tet;克隆菌株大肠杆菌 包装信息:1ug(20ul 50ng/ul);479元 备注:品牌:LEVIN。来尔文(武汉)生物医药研究院作为生物医药领域的科研单位,致力于细胞株定制和销售、基因产品定制和销售(如质粒)、新型纳米材料设计和制备、动物模型构建和指标检测、实验支持等。
对lentiCRISPR v2载体进行线性化,并验证酶切效果。 将合成的oligo进行退火处理,并与线性化的载体进行连接。 将连接产物转染进感受态细胞,进行扩增。 最后通过测序验证质粒构建是否成功。 三、应用指南 lentiCRISPR v2的应用非常广泛,可用于基因敲除、基因编辑等实验。 详细的应用指南和操作步骤可以参考Addgene网站(https...
这种免疫系统的独特机制使得它们成为简单易行的基因组工程工具。张锋团队改良的高滴度病毒的新载体(lentiCRISPRv2)也被广泛应用于生物科学实验中。 下面小编就介绍下 lentiCRISPRv2 质粒的构建经验与心得。 01 首先要根据找到的 sgRNA 订购 oligo 以下为目的基因 sgRNA 引物合成序列。sgRNA 引物设计请参考「5 分钟学会...