浙江大学药学院平渊教授团队采用高特异性靶向 NLRP3 的 Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 基因编辑技术，并以高效的经皮微针给药糖皮质激素的方式有效治疗炎症性皮肤病 (ISDs)，该研究以题为 "Microneedle-assisted genome editing: A transdermal strategy of targeting NLRP3 by CRISPR-Cas9 for synergistic therapy of infla...
exosomeRNP代表了一种新一代内源性囊泡,用于高效递送Cas9 RNP,可以产生肝特异性、强大的基因编辑,并实现肝脏疾病的精准治疗 。 图1:外泌体用于体内递送Cas9 RNP治疗肝脏疾病的示意图。ExosomeRNP通过分别靶向PUMA、CcnE1和KAT5,在急性肝损伤、慢性肝纤维化和原位HCC小鼠模型中显示出强大的治疗潜力。 Exosome和exoso...
RNP通过电穿孔包装在外泌体中,获得基因组编辑系统exosomeRNP。Wan等人设计了靶向p53上调凋亡调节因子(PUMA)、细胞周期蛋白E1(CcnE1)和K(赖氨酸)乙酰转移酶5(KAT5)的sgRNA并与cas9结合构建了RNP(这些因子/蛋白/酶在肝脏疾病的发生发展中起重要作用)。检测发现这...
首先在体外合成gRNA和可以表达Cas9蛋白的mRNA,然后通过瞬时转染技术将两者递送到细胞内,由细胞翻译合成Cas9蛋白,进而实现对靶基因的编辑。 3. 蛋白瞬转体系(RNP体系): 首先在体外将gRNA和Cas9蛋白混合成为gRNA和Cas9的复合效应物,然后通过瞬时转染技术(脂质体或电转等)将复...
RNP介导的CRISPR基因编辑 PharmaBIGStar News 对于CRISPR/Cas系统来说,最高效的打开方式就是跳过pDNA或mRNA在细胞内的转录或翻译,而是将Cas9蛋白和sgRNA直接进行递送,这可以最大程度地降低脱靶效应。目前大部分基于Cas9蛋白的递送体系都是以RNP(核糖核蛋白)的形式进行递送。
自体T细胞用Cas9蛋白转染，该蛋白与针对TRAC，TRBC（即内源性TCR缺失）和PDCD1（即PD-1缺失）的单个向导RNA（核糖蛋白； RNP复合物）复合，然后用慢病毒载体转导以表达转基因NY-ESO-1癌症特异性TCR。细胞在动态培养中扩增8至12天。在培养的最后一天，收获NYCE T细胞并将其冷冻保存在不溶性培养基中。对所有4个受...
德国进口LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统(原Amaxa 4D-Nucleofector核转仪),创新性地结合经典电穿孔技术和细胞特异性电转染液,实现了DNA、RNA(如crRNA、tracrRNA、gRNA、sgRNA)、RNP核糖核蛋白复合体、蛋白质(如Cas9核酸酶、切口酶、dCas9蛋白、Cas12a/Cpf1核酸酶)、小分子物质高效转染各类哺乳动物贴壁细胞和悬浮细...
CRISPR/Cas9系统一般有质粒DNA(pDNA),RNA或Cas9核糖核蛋白(RNP)三种不同生物形式,其中pDNA CRISPR/Cas9系统是最常用一种形式。 CRISPR/Cas9系统应用的难点在于把它选择性运输到想要的细胞中,这个过程需要载体的协助。一般由病毒载体和非病毒载体运输,载体技术越来越成熟,非病毒载体也越来越多样化,包括基于脂质的纳米载...
首先是利用病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)来递送基因编辑工具,VLPs 结构与病毒相似,但不含病毒遗传物质,能确保安全有效地输送 CRISPR 相关的 RNP。其次,通过对细胞系和小鼠受精卵进行实验,评估基因编辑效率。在实验过程中,使用了基因分型技术,如靶向深度测序、Sanger 测序和酶切等方法来鉴定编辑结果,还通过...
(3) 蛋白瞬转(RNP)：体外将Cas9蛋白和sgRNA混合，二者可以结合形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNP)，...