农业与生物技术:改良作物(如通过甲基化调控抗逆基因表达),或优化细胞工厂(调控代谢通路基因甲基化)。 六、挑战与改进方向 脱靶效应:sgRNA 设计不当可能导致 dCas9 结合非靶位点,引发意外甲基化(需优化 sgRNA 筛选和脱靶预测工具)。 甲基化效率差异:不同基因组区域的 CpG 密度、染色质开放程度影响修饰效率(可通过优...
i.Sanger测序与高通量测序技术原理,应用选择 e)测序数据分析 2.多基因编辑原理 a)同时编辑多个基因的策略选择,提高编辑效率的方法 b)多重靶点设计与互相干扰避免策略 3.多基因编辑载体构建实操 a)多sgRNA串联策略 b)多启动子设计策略与表达平衡考量 4.CRISPRa/CRISPRi(基因激活与基因抑制) a)dCas9-PVPR系统介...
dCas9-KRAB是dCAS系统中最常见的变体之一，其中的KRAB是克鲁伯相关盒结构域。这种变体专门用于抑制内源基因组位点上基因的转录。dCAS9- VPR：dCas9-VPR 是另一种促进或上调基因调控的变体。在这里，缺乏 Cas9 的内切酶与转录激活剂 VP64、p65 和 Rta 的 C 端相连，从而激活基因的转录活性位点。染色质重塑 研究...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具，其原理主要涉及以下几个关键方面：CRISPR - Cas9 系统基础 CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中，CRISPR 序列转录产生的 crRNA（CRISPR - derive...
△ CRISPR-dCas9系统的突破 梁好均教授与他的团队通过这项研究，在CRISPR-dCas9领域实现重大突破。他们设计的多模块系统增加了基因调控的精确性和灵活性。这种系统通过巧妙地融入microRNA感应器，构建了一个能响应内源性microRNA并允许内源基因可控激活的平台，其激活效率明显超越传统技术。△ 桥RNA的设计与功能 研究...
一、dCas9调控基因转录原理 Cas9蛋白具有独立结合DNA和切割DNA的结构域,对DNA的切割主要依赖于HNH和RuvC结构域,这两个结构域相互独立,分别去切割DNA的两条链,将HNH和RuvC的切割位点突变后既不影响蛋白质整体结构,同时又可以使其失去对DNA的切割能力,突变后的cas9蛋白可以在sgRNA的引导下结合到DNA上,但不对DNA起切割...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具,其原理主要涉及以下几个关键方面: CRISPR - Cas9 系统基础:CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中,CRISPR 序列转录产生的 crRNA(CRISPR - derived...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具,其原理主要涉及以下几个关键方面: CRISPR - Cas9 系统基础:CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中,CRISPR 序列转录产生的 crRNA(CRISPR - derived...
dCas9-TET1是编辑表观基因组的新技术之一。该系统由去甲基化酶TET1的催化结构域(CD)融合dCas9组成(图8)。使用dCas9-TET1可快速实现启动子的去甲基化,并诱导靶基因的表达上调(Liu et al., 2016;Liu et al., 2018)。dCas9-TET1去甲基化修饰系统可以在测试的启动子处使30%到60%的CpG去甲基化,从而驱动各种...
CRISPR/Cas9技术原理 CRISPR-Cas9技术包含两种重要的组分,一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白,而另一种则是具有导向功能的gRNA(guide RNA)。CRISPR-Cas9技术利用一段与靶序列互补的gRNA引导Cas9核酸酶对特异靶向DNA进行识别和切割,造成DNA的双链或单链断裂,...