2、RNA成像：研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变，得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性，但保留了结合酶活性，因此能够靶向目标RNA分子。目前有3种基于CRISPR-Cas13系统的RNA成像工具：Broad研究所张锋团队研发的dLwaCas13a-msfGFP融合蛋白、用于LncRNA失踪的dPspCas13b-EGFP、进行活体转录本成...
2. 基于dPspCas13b和dPguCas13b的RNA成像工具[2]。在2019年,中科院分子细胞科学卓越创新中心陈玲玲团队基于dPspCas13b和dPguCas13b开发了转录组成像工具。首先,该团队在多种dCas13蛋白中筛选出靶向性最好的dPspCas13b和dPguCas13b家族。其次,该团队通过大量实验确定了crRNA spacer最合适的长度;该团队还对荧光蛋白...
2、RNA成像:研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变,得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性,但保留了结合酶活性,因此能够靶向目标RNA分子。目前有3种基于CRISPR-Cas13系统的RNA成像工具:Broad研究所张锋团队研发的dLwaCas13a-msfGFP融合蛋白、用于LncRNA失踪的dPspCas13b-EGFP、进行活体转录本成像的...
Cas13蛋白家族包含两个亚型:(1)来自沙希纤毛菌的Cas13a蛋白(LshCas13a),正式名称为C2c2,属于VI型 (2)来自普雷沃氏菌的Cas13b 蛋白(PspCas13b),属于III型,该系统仅靶向和切割单链RNA,而不是单链或双链DNA。Cas13a蛋白的作用机制。Cas13a蛋白通过单个crRNA被...
CRISPR/Cas13系统属于CRISPR/Cas系统中的第二大类VI型,包含单一的效应蛋白质Cas13,与crispr RNA(crRNA)组装时形成一个由crRNA引导的RNA靶向效应复合物[2]。 截至目前,共发现有6种效应蛋白属于CRISPR/Cas13家族,即Cas13a、Cas13b、Cas13c、Cas13d、Cas13X和Cas13Y,Cas...
研究者在该组蛋白中还识别出两种新的蛋白家族F13a1和F13a2，它们具备与Cas13类似的双HEPN结构域，并与Cas13b和AbiF的单HEPN结构域有同源性。之后的结构比较、序列相似性和系统发育分析提示，AbiF、F13a1/2、c13c1和Cas13a/b/c/d蛋白可能具有共同的祖先AbiF，其中c13c1和F13a1/2很可能是AbiF向Cas13演化过程的...
RNA靶向VI型CRISPR系统(Cas13a、Cas13b和Cas13d),可直接切割哺乳动物细胞中的单链RNA。Cas13通过适当的引导RNA(gRNAs)被招募到特定的RNA序列,其可以与靶向RNA 形成碱基对。RfxCas13d是circRNA干扰的最佳系统,通过使用跨越BSJ位点的gRNAs靶向序列(BSJ gRNAs),具有最高的干扰效率,并且对其同源mRNA没有可检测的影响。
2、RNA成像:研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变,得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性,但保留了结合酶活性,因此能够靶向目标RNA分子。目前有3种基于CRISPR-Cas13系统的RNA成像工具:Broad研究所张锋团队研发的dLwaCas13a-msfGFP融合蛋白、用于LncRNA失踪的dPspCas13b-EGFP、进行活体转录本成像的...
2、RNA成像:研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变,得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性,但保留了结合酶活性,因此能够靶向目标RNA分子。目前有3种基于CRISPR-Cas13系统的RNA成像工具:Broad研究所张锋团队研发的dLwaCas13a-msfGFP融合蛋白、用于LncRNA失踪的dPspCas13b-EGFP、进行活体转录本成像的...
2、RNA成像:研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变,得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性,但保留了结合酶活性,因此能够靶向目标RNA分子。目前有3种基于CRISPR-Cas13系统的RNA成像工具:Broad研究所张锋团队研发的dLwaCas13a-msfGFP融合蛋白、用于LncRNA失踪的dPspCas13b-EGFP、进行活体转录本成像的...