2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
图2.慢病毒混合筛选工作流程。使用 LentiArray 慢病毒 Cas9 核酸酶选择杀稻瘟素抗性,生成表达 Cas9 的稳定细胞系。然后,以适当的 MOI 值用 LentiPool sgRNA 文库转导这些 Cas9 表达细胞,并进行嘌呤霉素抗性选择。然后对转导的细胞群施加选择性压力或处理,如药物或化学扰动物质。分离基因组 DNA 并通过 PCR 技术扩增...
CRISPR/Cas9系统的诞生,使碱基编辑、转录调控和表观遗传编辑、基因组规模的筛选以及细胞和胚胎治疗等方面得到广泛的发展和应用,CRISPR/Cas9文库的应用也让基础研究中大规模的基因组编辑和筛选成为现实。在筛选功能增益方面CRISPRa比较有效;在筛选...
Crispr文库筛选的方法通常分为两个主要步骤:构建文库和筛选文库。首先,构建文库需要利用sgRNA设计软件如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer(CLD)等批量设计sgRNA,再利用oligo芯片合成。sgRNA文库构建完成后还需进行sgRNA文库质粒的扩繁达到后续筛选实验所需使用量,当然文库质量的控制则需要高通量测序来获得,一旦...
CRISPR/Cas9高通量文库筛选方法中,最关键的步骤是构建慢病毒载体。将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系,确保每个细胞只进入1个病毒,从而实现针对不同sgRNA相对应基因的功能筛选。 阳性或阴性筛选筛选 工作的另一项重要步骤是选择恰当的筛选策略。根据研究目的不同,CRISPR高通量筛选分为...
CRISPR-Cas9文库建库流程 靶位点确认及sgRNA文库设计sgRNA文库芯片合成sgRNA文库构建QC验证文库质量sgRNA文库慢病毒包装感染稳定细胞株药物筛选实验细胞表型筛选NGS测序验证功能基因 CRISPR-Cas9文库应用方向 1、药物靶点确定与验证 CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中，通过大规模筛选技术，可以系统的分析、验证一些与...
1 内源性高通量上调编码基因的慢病毒文库。 2 包含70290个sgRNA靶点慢病毒文库。 3 同时靶向23430个编码基因转录本。 4 文库慢病毒总量约 5*108TU。 ➤个性化定制CRISPR/cas9慢病毒文库 HYY服务优势: HYY拥有CRISPR ko (GeCKO) 慢病毒文库及CRISPRa (SAM) 慢病毒文库,提供从药物发现到一体化服务的整体解决...
其操作流程主要包括: 1.sgRNA文库的设计与合成; 2.慢病毒载体的构建及感染宿主细胞; 3.表型选择:阳性或阴性筛选; 4.高通量测序与生物信息学分析; 5.验证候选基因和脱靶效应。 三.CRISPR/Cas9高通量文库筛选技术在肿瘤相关研 究等中的应用 CRISPR/Cas9技术因其能快速、...
CRISPRa/i文库 psgRNA文库 CRISPR-Cas9文库建库流程 靶位点确认及sgRNA文库设计 sgRNA文库芯片合成 sgRNA文库构建 QC验证文库质量 sgRNA文库慢病毒包装 感染稳定细胞株 药物筛选实验 细胞表型筛选 NGS测序验证功能基因 CRISPR-Cas9文库应用方向 1、药物靶点确定与验证 CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中,通过大规...