CRISPR-Cas9是一种基因编辑技术,可以通过切割DNA序列来实现基因敲除。 CRISPR-Cas9是最新一代基因编辑技术,其工作原理为首先根据靶基因合成sgRNA序列,sgRNA可以和Cas9蛋白结合,因为靶基因和sgRNA序列互补结合,sgRNA可携带着Cas9蛋白精确找到靶基因,并对其进行剪切,产生DNA双链断裂。断裂通过非同源端部连接(NHEJ)或同源定向...
一、CRIPSR/Cas9实现基因敲除的原理 CRISPR/Cas9系统是利用一段与靶序列互补的gRNA引导cas9核酸酶对特异靶向的DNA进行识别和切割，造成双链DNA断裂，然后细胞会利用自身具备的两种DNA修复机制对断裂的DNA进行修复，即非同源末端连接（Non-homologous end joining, NHEJ）或同源介导的修复（Homology-directed repair, HDR）...
1.基因敲除(Knockout):通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂(DSB),细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制修复断裂,过程中可能引入插入或缺失(indels)突变,导致目标基因功能丧失。 2.基因插入或替换(Knockin):利用同源重组(HDR)机制,在目标基因上引入特定的突变或外源序列。这需要提供一个含有所需改变的同源模板DN...
一、CRISPR基因敲入实验原理 CRISPR-Cas9基因敲入（KI, Knok in）是指Cas9内切酶切割双链DNA时，同时提供一段与靶基因高度同源的DNA修复模板，生物体即可启动HDR修复路径，将一段外源DNA定点插入基因内部。KI的外源基因可以是具有蛋白表达功能的编码基因，可以是参与基因调控的DNA元件，也可以是一段没有功能的DNA序列等...
1. 基因敲除（Knockout）：通过NHEJ修复机制，CRISPR/Cas9可以引入小的插入或缺失突变，从而破坏基因的功能，实现在细胞或生物体中敲除特定基因的目的。这对研究基因功能和疾病模型的建立非常有用。2. 基因编辑和基因修复：通过HDR修复机制，研究人员可以使用CRISPR/Cas9引入特定的DNA序列以修复突变基因或插入新的基因。
技术原理与流程 基因敲除技术优势 Cas9X使用新的实验模型将细胞系的敲除效率进行大幅的提升 1. 使用Cas9蛋白和gRNA的复合物直接进行电转，提高效率的同时减少非特异的切割；（目前报道脱靶率最低的方法）2. 使用高效的电转设备，具备更高的电转效率和细胞存活率；3. 使用更先进的单克隆稀释设备和方法，大幅提高阳性...
耐思Quick-KO®基因敲除试剂盒中的Cas9质粒和gRNA质粒分别携带Blasticidin和Puromycin/mCherry筛选标记，方便用户进行阳性细胞富集。3.转染细胞：将质粒转染到目标细胞中，让它们表达CRISPR-Cas9系统并编辑目标基因。转染可以通过电穿孔或者化学转染的方法进行。此外，针对转染效率低的细胞，也可以选择慢病毒款的耐思Quick-KO...
二、CRISPR/Cas9基因编辑的原理 核酸酶Cas9具有HNH和RuvC两个DNA切割结构域（图3A），其中HNH切割sgRNA靶向的DNA链，RuvC切割非靶向链。在sgRNA的引导下，Cas9定向切割目的基因，使DNA产生双链断裂（DSB）；然后经过细胞内源的DNA修复通路-非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）进行修复；最终实现对靶基因的敲除、...