粒曼LM CRISPR EasyKO试剂盒(RNP法)。 概念解析:CRISPR/Cas9 RNP法 CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法是将靶基因对应的多条体外化学合成的single-guide RNA(sgRNA)与Cas 9蛋白体外混合形成核糖核蛋白复合物(Ribonucleoprotein,即:RNP),通过电转化/脂质体转染的方式,以类似“瞬时”转染的流程将 RNP 递送到细胞体内,无需...
此外,与dgRNA rEphx2相比,RNP 1/1比例的TmRNP与RNP 2/1比例的TmRNP显著不同(TmRNP RNP 2/1 = 48.9℃;TmRNP RNP 1/1 = 49.7℃, p = 0.0206),与单独Cas9也显著不同 (TmCas9 Cas9 = 43.2℃;TmRNP RNP 1/1 = 49.7C, p<0.0001)。 这说明大多数Cas9形成了RNP复合体,RNP 1/1和dgRNA过量。由...
由肝细胞产生的外泌体具有靶向肝脏的能力,这是由于其同源组织靶向能力,并且具有将CRISPR-Cas9 RNP在体内递送进行治疗性肝组织基因编辑的潜力。 外泌体递送CRISPR-Cas9 RNP用于肝脏靶向的疾病治疗 浙江大学刘祥瑞、平渊和周天华课题组合作在Science Advances杂志上发表文章,报道了外泌体递送CRISPR-Cas9 RNP用于肝脏靶向的...
由肝细胞产生的外泌体具有靶向肝脏的能力,这是由于其同源组织靶向能力,并且具有将CRISPR-Cas9 RNP在体内递送进行治疗性肝组织基因编辑的潜力。 外泌体递送CRISPR-Cas9 RNP用于肝脏靶向的疾病治疗 浙江大学刘祥瑞、平渊和周天华课题组合作在Science Advances...
他们先使用nanoDSF检测大鼠胚胎中Cas9过量、等摩尔Cas9/dgRNA或dgRNA过量这几种情况下,RNP复合物的形成情况(图2A)。在所有条件下,添加dgRNA靶向的环氧化物水解酶2基因(dgRNA rEphx2),与单独Cas9相比,Tm都显著增加,表明RNP复合物的形成 (图2B)。
锐博生物riboEDIT™ CRISPR-Cas9 RNP(核糖核蛋白复合物)由化学合成的crRNA、tracrRNA及Cas9蛋白组成,化学合成crRNA和tracrRNA与Cas9蛋白混合后转染细胞,可快速实现靶基因的编辑。 详细了解锐博生物的CRISPR-Cas9基因编辑产品>> 基于Cas9 mRNA的全RNA体系和基于Cas9蛋白的RNP体系。由于无需繁琐的克隆构建,不再需要载体和...
转染是 CRISPR 核糖核蛋白 (RNP)、DNA 以及 RNA 分子被递送到细胞中的过程。CRISPR-Cas9 工作流程中具有挑战性的一个步骤是转染步骤,即如何将 CRISPR-Cas9 组分有效递送到选定的细胞系中。CRISPR 递送方法有很多,但最合适的方法根据应用的不同而不同。
以CRISPR/Cas9为例,RNP复合体由Cas9蛋白和sgRNA组成,通过将Cas9-gRNA RNP递送到细胞核内发挥基因编辑作用。RNP介导的CRISPR/Cas9基因编辑有以下优势:第一,Cas9-gRNA复合体可递送到多种类型的细胞,包括难以转染的细胞,如免疫细胞和干细胞,这一优势很大程度上决定了Cas9-gRNA RNP的临床治疗潜质。第二,将RNP直接递送...
根据递送形式以及不同的细胞,可以选择不同的递送方法,主要包括:物理方法、化学方法、以及病毒转导。其中,利用慢病毒转导质粒和电穿孔递送RNP是将CRISPR/Cas9导入细胞的两种主要方法。 CRISPR/Cas9技术的常规应用 基因敲除 在基因的上下游各设计一条向导RNA,将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中,向导RNA通过...