使用Precut SgRNA Cloning kit Oligo退火:95℃ 5min,每分钟降1℃至25℃ 连接反应:16℃过夜 转化DH5α感受态细胞 sgRNA活性验证 4.1 SSA报告系统 4.2 活性检测 转染48h后检测荧光素酶活性 设置阳性/阴性对照 计算切割效率(≥70%为合格) 使用Precut pSG-target Cloning kit 构建含靶位点的报告载体 共转染Cas9/s...
核酸酶Cas9具有HNH和RuvC两个DNA切割结构域（图3A），其中HNH切割sgRNA靶向的DNA链，RuvC切割非靶向链。在sgRNA的引导下，Cas9定向切割目的基因，使DNA产生双链断裂（DSB）；然后经过细胞内源的DNA修复通路-非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）进行修复；最终实现对靶基因的敲除、插入和突变修饰等（图3B）。对Ca...
Oligo退火:95℃ 5min,每分钟降1℃至25℃ 连接反应:16℃过夜 转化DH5α感受态细胞 sgRNA活性验证 4.1 SSA报告系统 4.2 活性检测 转染48h后检测荧光素酶活性 设置阳性/阴性对照 计算切割效率(≥70%为合格) 使用Precut pSG-target Cloning kit 构建含靶位点的报告载体 共转染Cas9/sgRNA表达质粒 5.基因敲除细胞系...
因此,推断功能性CRISPR-Cas9筛选可以识别转录调节因子,这些转录调节因子构成了从胎儿状态向成人状态过渡的屏障。为了鉴定区分FEnS和aOrgs的细胞表面标记物,作为其成熟状态的功能读数,作者利用了scRNA-seq数据集。结果显示:过滤细胞表面相关基因的DEGs列表将Ly6a(SCA1)和Kit(cKIT/CD117)鉴定为胎儿祖细胞和分泌细胞的标记...
CRISPR 系统由两个部分组成,一个是叫做 Cas9 的蛋白质,还有一个引导 RNA (guide RNA, gRNA),这是一串有一定遗传密码的核酸分子。把它们放在一起,就创造了一个工具,帮助调整生物体的基因组。为了做到这一点,CRISPR 会在生物体 DNA 中搜索特定...
改造后的CRISPR/Cas9系统成为研究者做基因编辑的首选工具。Cas9蛋白要成功识别目标序列必须满足两个条件:(1)sgRNA的5'端20nt和靶DNA之间碱基配对;(2)靶DNA的3'端有合适的PAM序列。CRISPR/Cas9切割目标DNA后产生DSB(双链断裂),DSB是一切基于核酸内切酶的基因编辑的基础。
表1. 汉恒生物cas9突变体相关产品 四、CRISPR/Cas9递送工具 CRISPR/Cas9应用广泛,根据目标细胞的不同,存在多种递送方式(图5),主要包括物理递送方法(如显微注射、电穿孔),化学递送方法(如脂质纳米颗粒、细胞穿透肽、多聚体),以及病毒递送方法(如慢病毒LV、腺病毒Ad和腺相关病毒AAV)。递送主要是将装载编码CRISP...
针对EpiQuik CRISPR / Cas9分析ELISA试剂盒(比色)EpiQuik CRISPR/Cas9 Assay ELISA Kit (Colorimetric)该产品的特点优势,欢迎查阅官网提供的产品说明书。 保存建议 请在您收到Epigentek的EpiQuik CRISPR / Cas9分析ELISA试剂盒(比色)后,参考说明书建议,使用不同的保存条件或温度来保存试剂盒内组分。 其他 Epigentek...
CRISPR/Cas9 快速构建试剂盒 CRISPR/Cas9是最新的利用一段小RNA来识别并剪切DNA的靶向基因操作技术,多篇文章已经证明技术可以高效进行细胞、动物、植物、酵母的靶向基因敲除和定点编辑。我公司隆重推出快速构建试剂盒(Cat VK001-xx): 1、单个质粒同时表达CAS9和gRNA 2、优化的连接接头,无需酶切连接,阳性克隆率高达...
通过qRT-PCR分析6个Tet-On 3G-Cas9-阳性HEK293稳定细胞系中Cas9的诱导表达情况。将HEK293细胞分别接种至2个孔(12孔板),以AAVS1-sgRNA慢病毒(MOI=5)进行转导。转导8小时后,添加0.5 μg/ml强力霉素至其中一孔诱导培养6天。6天后采用Guide-it Mutation Detection Kit (Code No. 631443)检测AAVS1基因编辑效率。