2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
CRISPR/Cas9高通量文库筛选方法中,最关键的步骤是构建慢病毒载体。将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系,确保每个细胞只进入1个病毒,从而实现针对不同sgRNA相对应基因的功能筛选。 阳性或阴性筛选筛选 工作的另一项重要步骤是选择恰当的筛选策略。根据研究目的不同,CRISPR高通量筛选分为...
首先,让我们了解Crispr文库筛选的原理。CRISPR/Cas9基因编辑技术是由Cas9蛋白(一种核酸酶)和sgRNA(向导RNA )构成的RNA―蛋白复合体,可利用sgRNA 识别并结合特定DNA序列,引导Cas9蛋白在目的基因特定区域进行切割,由于细胞内的非同源性末端连接机制(nonhomologous end joining, NHEJ)和同源重组修复机制(homologous recombinati...
Srinivas等人在Oncogene杂志上发表“PLK1 inhibition selectively induces apoptosis in ARID1A deficient cells through uncoupling of oxygen consumption from ATP production”,该研究通过高通量化学筛选发现肿瘤抑制因子ARID1A缺失的细胞对PLK1抑制非常敏感。相反,Brunello慢病毒sgRNA表达文库筛选表明,ARID1A缺陷细胞对PLK1抑制...
解决办法①：使用小量文库病毒来优化转染效率 原因②：过度传代 解决办法②：过度培养会使pool产生偏差。在细胞达到最佳筛选数量时就应该实行筛选操作了。五、CRISPR文库筛选FAQ 1. 对于MOI本身很高的细胞，应该怎么转染？如果目标细胞本身的MOI很高，可以尝试使用更低的病毒载量进行转染，以避免过度表达Cas9对细胞的不利...
CRISPR/Cas9技术原理 （Doetschman T et al., Circ Res. 2017）CRlSPR/Cas9gRNA文库筛选是利用CRlSPR/Cas9技术建立的动物全基因组或某类相关基因的gRNA文库，通过慢病毒侵染方式导入目的细胞，对细胞进行编辑，然后功能性筛选和富集细胞，通过NGS测序和生信分析的手段，筛选出具有特定功能的基因。gRNA文库筛选技术具有...
图5:聚焦CRISPR/Cas9筛选确定EHMT1和EHMT2敲除对HDAC抑制剂的增敏作用。 Leonhard Valentin Bamberg et al., Int. J. Cancer. 2022;151:1586–1601. 和元生物可提供本文所涉及的定制文库筛选及慢病毒包装服务 和元生物常用文库列表 和...
基因编辑文库筛选是一种利用基因编辑技术对文库中的基因进行编辑和筛选的方法。其基本原理是，首先构建一个包含所有潜在基因变异的文库，然后利用CRISPRCas9系统对文库中的每个基因进行编辑。编辑后的基因将表达出不同的性状，通过筛选和鉴定，可以找到导致特定性状变异的关键基因。在植物中，CRISPRCas9系统介导的基因编辑...