2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
CRISPR/Cas9高通量文库筛选方法中,最关键的步骤是构建慢病毒载体。将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系,确保每个细胞只进入1个病毒,从而实现针对不同sgRNA相对应基因的功能筛选。 阳性或阴性筛选筛选 工作的另一项重要步骤是选择恰当的筛选策略。根据研究目的不同,CRISPR高通量筛选分为...
CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中，通过大规模筛选技术，可以系统的分析、验证一些与抗药性相关的基因，从而为疾病治疗提供相关数据。SCIENCE发表文章[1]，研究人员利用CRISPR-Cas9文库筛选人类黑色素瘤A375细胞中的18,080个基因进行筛选，最终发现NF2、CUL3等4个基因参与了黑色素瘤A375细胞中的耐药调节过程。
psgRNA文库 CRISPR-Cas9文库建库流程 靶位点确认及sgRNA文库设计 sgRNA文库芯片合成 sgRNA文库构建 QC验证文库质量 sgRNA文库慢病毒包装 感染稳定细胞株 药物筛选实验 细胞表型筛选 NGS测序验证功能基因 CRISPR-Cas9文库应用方向 1、药物靶点确定与验证 CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中,通过大规模筛选技术,可以...
首先,让我们了解Crispr文库筛选的原理。CRISPR/Cas9基因编辑技术是由Cas9蛋白(一种核酸酶)和sgRNA(向导RNA )构成的RNA―蛋白复合体,可利用sgRNA 识别并结合特定DNA序列,引导Cas9蛋白在目的基因特定区域进行切割,由于细胞内的非同源性末端连接机制(nonhomologous end joining, NHEJ)和同源重组修复机制(homologous recombinati...
CRISPR/Cas9技术原理 （Doetschman T et al., Circ Res. 2017）CRlSPR/Cas9gRNA文库筛选是利用CRlSPR/Cas9技术建立的动物全基因组或某类相关基因的gRNA文库，通过慢病毒侵染方式导入目的细胞，对细胞进行编辑，然后功能性筛选和富集细胞，通过NGS测序和生信分析的手段，筛选出具有特定功能的基因。gRNA文库筛选技术具有...
这是首次关于CRISPR文库的研究,显示出比shRNA文库更有效的筛选效果。但在文库设计初始,对sgRNA活性规则知之甚少,而非活性和非特异性的sgRNA会降低文库有效基因的覆盖率及靶基因的准确性。(关于CRISPR/Cas9系统详细介绍可点击查看:CRISPR/Cas9文库) 此后,随着技术的迭代升级,基于CRISPR/Cas9的工具也得到了快速发展,2016...
层面的基因筛选呢? 先看流程: 如果CAS9和sgRNA通过两个载体导入细胞,那么需要就叫做“双载体”系统,看左图。 如果CAS9和sgRNA通过一个载体导入细胞,那么需要就叫做“单载体”系统,看右图 。 筛选原理: 主要原因是利用了慢病毒整合基因组的特性,以单载体文库说明: ...
图5:聚焦CRISPR/Cas9筛选确定EHMT1和EHMT2敲除对HDAC抑制剂的增敏作用。 Leonhard Valentin Bamberg et al., Int. J. Cancer. 2022;151:1586–1601. 和元生物可提供本文所涉及的定制文库筛选及慢病毒包装服务 和元生物常用文库列表 和...