2012年,由RNA介导的基因组编辑技术CRISPR/Cas9正式开始发展起来,并完成了在哺乳动物细胞中的基因组编辑。 基因编辑技术是通过基因的定点突变,以小片段的删除及目的基因的插入等方式对基因组进行精确修饰的一种技术,是研究基因功能的重要手段。目前,基因编辑技术主要经历了3个不同的研究阶段:锌指核酸酶(ZFNs)是第一代...
CRISPR/Cas9技术在动物细胞系构建中的应用 随着CRISPR/Cas9基因编辑技术的研究深入和不断完善,该技术已成为动植物基因功能研究和建立动物细胞系和疾病模型的主要手段,尤其在动物细胞系的建立方面起到了重要的作用。CRISPR/Cas9基因编辑技术在...
因此,包装成SpCas9(4.2kb),sgRNA,靶DNA和相关启动子和调控序列通常是不可能的,只能用SaCas9(3.2kb)基因,和sgRNA,靶DNA和相关启动子和调控序列一起整合到AVV载体中构建表达克隆。或者SpCas9, sgRNA单独包装入AVV载体中,已被用于小鼠大脑和肝脏中基因编辑。另外一种选择是使用split-intein Cas9 system,将每一半包装...
摘要 CRISPR—Cas9基因编辑技术是一种新的基因编辑技术,可以在靶基因位点直接进行基因组编辑。它由一条导向RNA(shortsingleguideRNA,sgRNA)指导Cas9核酸酶识别和切割双链DNA,诱发非同源末端...展开更多 The CRISPR-Cas9 system is a new targeted nuclease for genome editing, which can directly introduce ...
多位生物学家通过原核细胞或者体外试管实验方法推动CRISPR基因编辑前进的研究铺下坚实的理论基础。但是动物或者人类细胞结构和环境的复杂性远远高于原核或者古细菌,以及动物到人类的技术演进上将存在巨大瓶颈。 2013年,Broad研究所的张锋教授首次将Cas9技术应用到哺乳动物细胞内,建立小鼠的疾病模型[9]。CRISPR-Cas9技术的快速...
多位生物学家通过原核细胞或者体外试管实验方法推动CRISPR基因编辑前进的研究铺下坚实的理论基础。但是动物或者人类细胞结构和环境的复杂性远远高于原核或者古细菌,以及动物到人类的技术演进上将存在巨大瓶颈。 2013年,Broad研究所的张锋教授首次将Cas9技术应用到哺乳动物细胞内,建立小鼠的疾病模型[9]。CRISPR-Cas9技术的快速...
更容易获得纯合子突变体,细胞毒性小,无物种限制等优势,但也存在脱靶效应等缺点.目前,CRISPR-Cas9技术已被广泛用于肿瘤相关研究中,尤其在构建实验动物肿瘤模型中取得许多重要成果.我们主要对CRISPR-Cas9基因编辑技术在构建实验动物肝癌模型,结直肠癌模型,肺癌模型,宫颈癌模型,白血病模型,脑瘤模型中的研究现状及应用进展做...
近年来CRISPR/Cas9基因编辑技术广泛用于构建动物模型以及细胞层面的研究。 1、 CRISPR/Cas系统组成 1.1、 CRISPR/Cas结构与分类 CRISPR/Cas系统依Cas蛋白的不同可分为2个大类,5个亚型[4]。其中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ为第1类,Ⅱ、Ⅴ为第2类[10]。CRISPR/Cas系统分为CRISPR序列和Cas蛋白,CRISPR序列是一段DNA序列,由多个...
CRISPR/Cas9在农作物改良中的应用 引言 基因组编辑技术是近些年新发展起来的一种对基因组进行精准修饰的技术,它能在基因组上进行定点突变、定点插入或删除、基因置换、在两位点或多位点同时定点突变或小片段缺失等操作,已经成为目前发育生物学中的重要工具。该技术可以用于系统地研究基因、调控元件在特定生理或发育过程中...
(2)模型构建 疾病模型主要用于模拟人类疾病的生物学和病理特征的研究,在疾病发生机制和药物筛选等方面中发挥关键作用。 大多数动物模型都是通过敲除特定基因构建的[10]。研究人员利用CRISPR技术靶向猴子SHANK21基因的外显子3,成功构建了由于SHANK3基因突变而导致猴子及其F1后代的ASD模型,显示出非典型的自闭症表型,如重复...