Chin及其同事展示了将Geminin残基(aa 1-110)融合到Cas9的C-末端,允许细胞周期依赖性的Cas9表达,从而将HDR介导的基因组插入效率提高1.9倍。 Doudna及其同事观察到,通过在不同细胞系和人类原代细胞中定时递送Cas9-guide RNA核糖核蛋白复合物,HDR介导的敲入效率很高。 (4) 供体模板DNA的修改。外源DNA和同源臂的长度是...
最近,科学家发现了新的CRISPR-associated (Cas)蛋白,其中由Cas12a介导的基因编辑能显著降低脱靶率。文中对CRISPR/Cas系统的发现历史、组成和分类、工作原理进行概述,并总结了该系统的最新研究进展及在斑马鱼Danio rerio中的应用。 1970年,DNA重...
斑马鱼CRISPR/Cas9系统肿瘤长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA。研究表明,lncRNA在剂量补偿效应(Dosage compensationeffect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中具有重要作用。NONIRET002679是斑马鱼lncRNA,利用生物信息学分析的方法得知,其与人的lncRNA...
她们因开发出强大且应用范围极广的基因组编辑工具CRISPR-Cas9获奖,CRISPR被誉为本世纪目前为止生物技术领域的最大突破。 笔者上个月也对该新闻进行了报道,当时心中也有疑问,为什么为人熟知的CRISPR/Cas9技术的先驱,MIT-Harvard Broad研究所的张锋没有获奖。读者中也有很多人产生同样的疑问。 今年4月15日, Broad研究所...
CRISPR-Cas9系统不仅能对基因组进行单个位点的特异性识别,还可同时对基因组的多个位点进行修饰,实现对基因组的编辑如基因敲除、基因敲入的功能。目前,CRISPR-Cas9技术已在斑马鱼、哺乳动物细胞和小鼠动物模型中,通过可编程RNA实现了基因的精确修饰。可以预见,CRISPR-Cas9技术将在基础医学和临床医学领域发挥重要的作用。
总的来看,CRISPR-Cas9编辑可以引入体内非预期的突变,且这些突变可以传递给下一代。此外,成年初始斑马鱼在其生殖细胞中镶嵌,其后代中有26%携带脱靶突变,目前,CRISPR–Cas9虽然在以往的基因编辑技术的基础上有所改进,但脱靶效应无法完全消除。对...
目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰,修饰类型包括基因定点InDel突变、基因定点敲入、两位点同时突变和小片段的缺失.由于其突变效率高、制作简单及成本低的特点,被认为是一种具有广阔应用前景的基因组定点改造分子工具.本文从CRISPR/Cas的研究历史、分类、作用机理以及基因定点修饰应用等...
性以及可实现DNA序列的定向突变而被广泛使用.斑马鱼的park2基因位于第13号染色体上,编码的Parkin蛋白是一个E3泛素连接酶.该基因在斑马鱼中的功能还不清楚.利用CRISPR/Cas9系统,首次在斑马鱼胚胎中实现了park2基因的大片段删除.由于斑马鱼在发育和疾病研究中有很大优势,实现park2基因敲除将有助于...
目前,在全基因组范围内筛选表型是基因功能研究的热点方向,将CRISPR/Cas9系统与全基因组鉴定和后续的功能分析技术相结合,可以在分子、细胞和个体层面对生物进行全基因组范围的功能筛选,从而获得新的功能基因或特异性遗传位点,加快后续研究进展[13]。 本文综述了利用CRISPR/Cas9系统在全基因组中高通量筛选功能基因和调控...
基因编辑(gene editing)技术是指在基因组水平进行基因的定点插入/缺失突变、敲除、多位点同时突变和小片段删除等精确操作技术。通过对基因编辑技术的研究，可以帮助人类探索生命本质，揭开疾病发生之谜，寻求疾病预防与治疗的有效途径［1］。基因编辑的最初技术手段为同源重组介导的基因打靶技术(gene targeting),该技术虽...